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目的：宫颈癌变的原因之一是正常细胞周期调控的丧失.TopoⅡα是一种重要的核酶,参与DNA复制、转录、修复和细胞周期调控.在许多人类的恶性肿瘤中表达上调.p16 是调控细胞周期的重要的抑癌基因,其表达异常和大多数的恶性肿瘤有关.本研究通过检测Topo Ⅱα和p16在宫颈癌前病变和宫颈癌中的表达及其与高危型人乳头状瘤病毒感染的关系,以期为宫颈癌前病变的早期诊断提供理论依据.
方法：取2006年1月～2006年12月在温州医学院附属二院门诊或住院进行宫颈病变诊治的患者135例,其中包括各级CIN和宫颈鳞癌的患者.并随机选取同期就诊的慢性宫颈炎患者作为研究对象.运用第二代杂交捕获法(HC2)检测HR-HPV的表达.活体提取组织,所有标本术后经HE方法染色、重新诊断并校正分组,确定CINⅠ38例,CINⅡ 32例,CIN Ⅲ 35例,宫颈鳞癌30例,慢性宫颈炎30例.运用免疫组织化学法(SP法)检测上述患者宫颈组织中TopoⅡα和p16的表达.
结果：(1)通过HC2检测,HR-HPV在慢性宫颈炎、CINⅠ、CINⅡ、CIN Ⅲ及SCC中的阳性率分别为20﹪、63.2﹪、87.5﹪、94.3﹪和96.7﹪,随着宫颈病变的加重,HR-HPV的感染率显著升高,差异有显著性(P<0.05).(2)通过免疫组化SP法,TopoⅡα在正常宫颈鳞状上皮不表达或低表达,染色浅,局限于基底膜附近的上皮细胞的胞核.在CIN和SCC中主要表达于异型细胞、肿瘤细胞的胞核.Topo Ⅱα在正常宫颈上皮组织、CIN Ⅰ、CINⅡ、CIN Ⅲ、SCC中的表达率分别20﹪(6/30)、15.8﹪(6138)、46.9﹪(15/32)、85.7﹪(30/35)和90﹪(27/30).Topo Ⅱα的表达与宫颈病变的严重程度呈正相关(r<,s>=0.673,p<0.05).正常宫颈上皮组织与CINⅠ之间表达差别无显著性,低于CINⅡ、CIN Ⅲ、SCC组;CIN Ⅲ、SCC中Topo Ⅱα的表达高于CIN Ⅱ(p<0.05).(3)通过免疫组化SP法,p16阳性染色于异型细胞和肿瘤细胞的胞核和胞浆.在宫颈正常上皮、各级CIN和SCC中阳性表达率分别为3.3﹪(1/30)、97.4﹪(37/38)、96.9﹪(31/32)、100﹪(35/35)、100﹪(30/30).p16的表达与宫颈病变的程度正相关(r<,s>=0.711,p<0.05).CINⅠ、Ⅱ、Ⅲ组和SCC组之间p16的阳性表达率无明显差异,但均高于正常宫颈组织(p<0.05).(4)HR-HPV阳性的患者的宫颈病灶组织中TopoⅡα阳性表达率为64.2﹪(77/120),HR-HPV阴性患者的宫颈病灶组织中TopoⅡα的阳性表达率为13.3﹪(6/45),两者差别有显著性(p<0.05).TopoⅡα表达强度与HR-HPV的感染正相关(r<,s>=0.454,p<0.05).(5)HR-HPV阳性的患者的宫颈病灶组织中p16阳性表达率为95.8﹪(115/120),HR-HPV阴性患者的宫颈病灶组织中p16的阳性表达率为42.2﹪(19/45),两者差别有显著性(p<0.05).p16表达强度与HR-HPV的感染正相关(r<,s>=0.728,p<0.05). (6)HR-HPV、p16INK4A、Topo Ⅱα用于筛查宫颈癌前病变(包括宫颈癌)时,其灵敏度、特异度分别为(84.4﹪、80﹪)、(98.5﹪、96.67﹪)、(60.69﹪、80﹪);ROC曲线下面积分别为0.82、0.989、0,742.用于筛查宫颈严重病变(CIN Ⅲ和SCC)时其灵敏度、特异度分别为(95.38﹪、42﹪)、(100﹪、31﹪)、(87.69﹪、73﹪).ROC曲线下面积分别为0.691、0.806、0.870.
结论：1.Topo Ⅱα的表达随着宫颈癌前病变的严重程度而上调,可能参与宫颈上皮的异常增殖和恶性转变.2.TopoⅡα表达的上调与HR-HPV感染有关,可能是HR-HPV感染后导致细胞恶性转化的中间行为.3.p16在宫颈癌前病变和宫颈癌组织中表现为过表达.且与HR-HPV感染正相关.可能是HR-HPV病毒整合入宿主细胞后的特征性的基因产物.4.p16免疫组化检测提高了CIN筛查的特异性,TopoⅡα检测有助于CIN的分级,提高对重度CIN的特异性。P16和TopoⅡα可以作为CIN早期诊断的辅助指标。