前言 肝纤维化是指肝脏内细胞外基质（extracellular matrix,ECM）的过度沉积。近年来的研究表明,在众多的致纤维化细胞因子中,转化生长因子-β（transforming growth factor-β,TGF-β）的促纤维生成作用最强;活化的肝星状细胞（hepatic stellate cell,HSC）则是肝脏内最主要的纤维生成细胞。 Smads蛋白家族作为细胞内信号转导蛋白,是迄今唯一已被证实的TGF-β受体（TGF-β receptor,TβR）作用底物。近年来,众多研究已经证实TGF-β在肝纤维化形成过程中的致纤维化作用。而Smads蛋白在这一过程中究竟充当了什么角色,目前还不是很清楚。本项研究运用蛋白免疫印迹杂交方法（Western blotting）研究在外源性TGF-β₁的刺激下,体外培养的活化的大鼠HSC内磷酸化Smad2或Smad3（phospho-Smad2 or-Smad3,p-Smad2 or-Smad3）与Smad7表达的变化,阐明有TGF-β₁刺激的条件下,活化的大鼠HSC内p-Smad2或一Smad3和Smad7这两类细胞内信号转导蛋白表达变化的特点,进一步认识促肝纤维化的细胞内分子机制,为寻找防止肝纤维化新的治疗靶点提供实验依据。 材料与方法 在本研究中,我们对活化的大鼠HSC进行体外培养,然后分别选取生长状态良好的不同的三代细胞,用含TGF-β₁（浓度5ng/ml）的无血清HSC培养液与活化的大鼠HSC共同培养0小时、0.5小时、1小时、4小时、8小时、24小时后,分别弃去培养液,先后加入细胞裂解液100μl、PMSF 4μl、Aprotinin 1μl,于冰上静置20分钟,然后用橡皮刮将细胞刮下,收于微量离