【摘 要】
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MicroRNA是一类细胞内源性的非蛋白编码的小分子RNA,它通过调控蛋白表达在生命过程中起着重要的作用。MicroRNA的分析对进一步研究其生物功能及疾病诊断都具有重要的意义。适
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MicroRNA是一类细胞内源性的非蛋白编码的小分子RNA,它通过调控蛋白表达在生命过程中起着重要的作用。MicroRNA的分析对进一步研究其生物功能及疾病诊断都具有重要的意义。适配体是一类新的具有类似抗体识别功能的核酸分子,比传统抗体更稳定,保存时间长,可以进行多种修饰。孔雀石绿适配体(MGA)是由38个核糖核苷酸构成的一段RNA序列。孔雀石绿(MG)是一种三苯甲烷类染料,由于不具备分子刚性结构而没有荧光。孔雀石绿能够与孔雀石绿适配体特异性结合形成三维空间结构,起到固定孔雀石绿平面结构的作用,从而使孔雀石绿产生强的荧光发射。本论文中我们建立了一种基于适配体放大技术方法来检测miR-143。首先根据目标miR-143序列设计扩增模板,该模板包括:目标miR-143互补序列,T7RNA聚合酶启动子序列和孔雀石绿适配体互补序列。当目标分析物miR-143存在时,miR-143与模板杂交,在Bst聚合酶作用下延伸产生T7启动子,T7RNA聚合酶能够识别T7启动子,并以含有T7启动子的双链DNA为模板,合成RNA孔雀石绿适配体。孔雀石绿适配体与孔雀石绿结合后在650nm处发射荧光。该方法可以定量检测到50pmol/L的miR-143,具有4个数量级的动态范围。该方法放大与检测同时进行,操作简便,费用低,所以该方法在microRNA分析方面具有很好的应用前景。
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