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酵母β-1,3-D-葡聚糖是一种重要的生物效应调节剂,它能够诱导生物活性、提高宿主免疫功能。本文以药用酵母粉为原料,采用一种新的工艺来制备β-1,3-D-葡聚糖,并对其羧甲基化衍生物进行了研究。主要研究内容和结果如下:
1)研究了酵母细胞的破碎方式
比较超声波法、白溶法、酶促自溶法三种细胞破碎方式,三种处理方式下下,单位细胞干物质损失率分别为35.87%、44.03%、53.92%,表明酶促自溶法是细胞破碎的一种较好的方法。酶促自溶的最佳工艺条件为:温度52℃、pH7.0、酶添加量1260U/g、浓度10%、时间15h。
2)酵母β-1,3-D-葡聚糖的提取工艺
采用超声波辅助木瓜蛋白酶酶解法来提取酵母β-1,3-D-葡聚糖,通过单因素实验和正交实验确定最佳的酶解条件为:温度65℃、pH7.0、酶添加量540U/g、酶解时间3h,酶解后得到的多糖产品中蛋白质含量为8.2%(干基含量),蛋白质去除率达到85.5%。
3)酵母β-1,3-D-葡聚糖的纯化及其结构表征
以次氯酸钠氧化法纯化酵母β-1,3-D-葡聚糖。理化成分分析表明,葡聚糖中不含蛋白质、核酸、脂肪、糖原等其它杂质,多糖含量为93.12%(湿基含量)。同时,高效液相色谱、红外光谱和酶解反应揭示,纯化后的酵母葡聚糖产品为纯的β-1,3-葡聚糖。
4)酵母β-1,3-D-葡聚糖的羧甲基化
通过单因素实验和正交实验确定了最佳的羧甲基化条件为:碱化氢氧化钠用量(NaOH/GlucaJl,m/m)1、一氯乙酸用量(clcH2COOH/Glucan,m/m)2、温度70℃、反应时间4h。制备的羧甲基化葡聚糖的取代度为1.02,在常温(25℃)下完全溶于水。红外光谱表明,葡聚糖分子中成功引入羧甲基官能团。