目的:免疫系统是人体健康的基石,在预防传染病和辅助治疗癌症等方面发挥着重要作用。2019年底爆发的“COVID-19”事件引发了全球公共卫生和经济危机。这次事件让人们深刻意识到增强免疫力的重要性。为满足临床需要,有必要开发新的功能食品或治疗药物来提高人体免疫功能,而天然产物尤其是药食同源中药被认为是发掘潜在的免疫调节作用成分的重要来源。人参作为药食同源的补益药材在提高免疫力方面有着重要的作用,目前对其提高免疫功能的物质基础研究主要集中在皂苷、多糖类成分,而对于其中所含糖肽类成分的免疫活性鲜有报道。本研究旨在提升人参糖蛋白的提取率从而提高人参糖肽得率的基础上,分离纯化人参糖肽,并对其进行理化性质和结构表征,考察人参糖肽的免疫调节作用,探究人参糖肽提高免疫力功能的构-效关系,为人参糖肽的开发利用提供科学依据,为研发提高免疫力药物及保健食品奠定理论基础。方法:1.人参糖蛋白制备工艺优化:采用煎煮法提取,水提醇沉法分离,通过单因素实验结合Box-Behnken响应面法优化人参糖蛋白的制备工艺;通过膜透析法与Sevag法纯化人参糖蛋白。2.人参糖肽复合物的制备与分离:以制备的人参糖蛋白为原料,采用酶解法制备人参糖肽,通过单因素实验结合正交试验优化人参糖肽复合物的制备工艺;采用超滤法根据分子量的不同对人参糖肽复合物进行分离。3.人参糖肽复合物结构表征:采用苯酚硫酸法测定总糖含量,应用BCA法测定蛋白质含量;采用高效液相色谱法（HPLC）测定人参糖肽总提取物与分离得到的不同人参糖肽组分的分子量分布;利用HPLC法测定其1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮（PMP）柱前衍生化产物的组成糖;通过异硫氰酸苯酯（PITC）柱前衍生化HPLC法对人参糖肽总提取物与不同分子质量人参糖肽复合物的氨基酸组成进行测定。4.人参糖肽复合物的免疫活性研究:采用环磷酰胺（CTX）致免疫低下动物模型,通过小鼠碳廓清实验、外周白细胞总数、小鼠迟发型变态反应（DTH）、血清溶血素实验、脾细胞增殖试验、NK细胞活性测定及细胞因子检测,评价人参糖肽总提取物及不同分子量人参糖肽组分提高小鼠免疫力的生物活性。结果:1.人参糖蛋白的最佳制备工艺:提取时间1.5 h、提取次数3次、料液比15.4:1（m L:g）、乙醇体积分数72%,在该条件下糖蛋白的提取率为24.14%;通过纯化后,人参糖蛋白的含量为88.4%。2.人参糖肽复合物的制备与分离:最优酶为胰蛋白酶、在底物浓度为14%、加入6500 u/g的胰蛋白酶、调节p H为7.75,调节温度至45.0℃的条件下酶解6 h人参糖蛋白,可得到最佳水解度为46.81%,且得率为17.02%;超滤后得到不同分子质量的人参糖肽复合物1、2、3,分别为＞10 k Da、10-1 k Da,＜1 k Da。3.人参糖肽复合物结构表征:确定人参糖肽总复合物的总糖含量为76.20%、蛋白质含量为5.13%,平均重均分子量（Mw）为4.561 k Da,单糖组成为甘露糖、鼠李糖、半乳糖醛酸、葡萄糖、半乳糖、阿拉伯糖、岩藻糖,氨基酸组成为（天冬、谷、胱、丝、甘、组、精、苏、丙、脯、酪、缬、蛋、半胱、异亮、亮、苯丙、色、赖）氨酸;人参糖肽复合物1的总糖含量为72.36%、蛋白质含量为0.65%,平均重均分子量（Mw）为18.302 k Da,单糖组成与人参糖肽总复合物单糖组成相同,氨基酸组成与人参糖肽总复合物氨基酸组成相同;人参糖肽复合物2的总糖含量为89.35%、蛋白质含量为6.76%,平均重均分子量（Mw）为1.447 k Da,单糖组成为甘露糖、半乳糖醛酸、葡萄糖、半乳糖、阿拉伯糖,氨基酸组成与人参糖肽总复合物氨基酸组成相同;人参糖肽复合物3的总糖含量为77.03%、蛋白质含量为14.08%,平均重均分子量（Mw）0.469 k Da,单糖组成比人参糖肽复合物1的单糖组成少岩藻糖,氨基酸组成与人参糖肽总复合物氨基酸组成相同。4.人参糖肽复合物的免疫活性研究:不同剂量与不同分子量的人参糖肽均可提高小鼠免疫器官指数、增加小鼠碳廓清的吞噬指数、增强小鼠增殖能力、增加小鼠NK细胞活性、加强小鼠DTH程度、增加小鼠产生的溶血素、提高小鼠外周血白细胞数、升高小鼠TNF-α,IL-2,IL-6免疫细胞因子含量的作用,且具有一定的剂量依赖性。其中＜1 k Da人参糖肽复合物可极显著提高小鼠脾细胞增殖能力（p＜0.01）、极显著提高小鼠DTH程度（p＜0.01）、极显著提高NK细胞活性（p＜0.01）,对细胞免疫和NK细胞活性有较好的作用。而＞10 k Da的人参糖肽复合物可极显著增加小鼠产生的溶血素（p＜0.01）、极显著提高小鼠碳廓清的吞噬指数（p＜0.01）、极显著提高TNF-α含量（p＜0.01）,对体液免疫及增加TNF-α的表达情况具有较好的作用。结论:本文对人参糖肽复合物的制备工艺及免疫活性进行考察,通过水提醇沉法,采用单因素实验结合响应面法得到了人参糖蛋白的最佳制备工艺,并对其进行纯化。在此基础上,通过酶解法,采用单因素结合正交实验,得到了人参糖肽复合物的最佳酶解工艺,通过超滤法分离得到了三段不同分子质量的人参糖肽复合物。通过苯酚硫酸法、BCA法以及HPLC法对其进行结构鉴定,结果表明三段不同分子质量的人参糖肽复合物的理化性质、分子量和单糖组成均有不同,虽氨基酸组成相同,但其摩尔比亦有差异。继而通过构建免疫低下动物模型,证实了人参糖肽总提取物及不同分子量的人参糖肽均具有提高免疫力的作用,且较低与较高分子量的人参糖肽复合物的免疫效果较明显。本研究提升了适用于工业化生产的人参糖蛋白和人参糖肽制备工艺,初步鉴定了人参糖肽复合物的基本结构,评价了人参糖肽复合的免疫活性且初步分析了人参糖肽复合物提高免疫功能的构效关系,为人参糖蛋白和人参糖肽的产业化开发提供了理论依据,丰富了人参糖肽的结构组成和生物活性,为人参糖肽复合物在提高免疫力的药品、食品、保健食品等领域的产品开发奠定基础。