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结球甘蓝（Brassica oleracea L.var.capitata L.）简称甘蓝,起源于地中海沿岸,是十字花科芸薹属的一种重要蔬菜,在蔬菜周年供应和出口贸易中占有重要地位。普通结球甘蓝叶色多为绿色、深绿色或灰绿色,叶片及茎表皮覆盖有一层蜡质。蜡质缺失亮绿甘蓝由普通甘蓝突变而来,具有叶色亮绿美观等特点。本研究以两份甘蓝蜡质缺失突变体LD10和10Q-974为研究材料,对两份材料蜡质缺失突变基因进行了定位,并对LD10候选目的基因进行了克隆和功能验证。主要结果如下:1. 甘蓝蜡质缺失突变体LD10和10Q-974均具有叶片亮绿、商品性好的特点,且两者表皮蜡质晶体严重缺失,其中LD10蜡质缺失成分主要是C22-C30初级醇,10Q-974缺失成分主要是C29和C33烷烃。试配杂交组合结果显示,两甘蓝突变体材料的亮绿性状均具有较好的育种应用价值。2.以蜡质缺失突变体LD10和普通有蜡质芥蓝材料M36为亲本构建六世代群体,其中F1群体叶面均有蜡质覆盖,F2群体有蜡质和无蜡质植株的分离比例符合3:1,BC1群体有蜡质和无蜡质植株的分离比例符合1:1,BC2群体均表现为有蜡质性状,据此推断LD10的蜡质缺失性状由1对隐性基因（Bo GL4）控制。以同样的方法对10Q-974的蜡质缺失性状进行遗传分析,结果表明该突变体的蜡质缺失性状由1对显性基因（Bo GL1）控制。3.在连锁标记筛选、基因定位的基础上,将蜡质缺失突变体LD10的目的基因Bo GL4精细定位在1号染色体标记C01g SSR 147和C01g SSR 150之间,两标记间的物理距离是170kb,遗传距离为0.2c M,该定位区间内存在一个与拟南芥蜡质合成基因CER4同源的基因Bol013612,将其选定为Bo GL4的候选目的基因;将突变体10Q-974的目的基因Bo GL1定位于甘蓝8号染色体末端177kb的区间内,将定位区间内一个与拟南芥蜡质合成基因CER1同源的基因Bol018504确定为Bo GL1的候选目的基因。4.对Bol GL4和Bo GL1的候选目的基因进行克隆、测序,结果表明Bo GL4的候选目的基因Bol013612在g DNA上存在一个碱基的替换突变（A替换为G）,该突变导致c DNA序列上六个碱基的插入;Bo GL1的候选目的基因Bol018504在g DNA和c DNA水平上均未发现碱基突变,排除了Bol018504是Bo GL1基因的可能性。5.利用拟南芥蜡质缺失突变体cer4-1为转化受体,对甘蓝Bo GL4的候选目的基因Bol013612进行了功能验证。结果表明转Bol013612基因的拟南芥突变体蜡质缺失性状得到了恢复;而转突变体LD10的Bol013612基因的拟南芥突变体蜡质缺失性状没有获得恢复,表明LD10的Bol013612基因存在功能缺失,这一实验结果进一步证明了LD10的蜡质缺失性状是由基因Bol013612突变造成的。