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目的:观察TIEGsiRNA对AGEs介导肾小管上皮细胞Smad信号通路的影响。
方法:(1)AGEs对体外培养正常大鼠近端肾小管上皮细胞(NRK52E)Smad信号通路的影响:体外培养NRK52E细胞,无血清化24h后给予AGE-BSA或牛血清白蛋白(BSA)刺激24h和48h,收集细胞。采用免疫细胞化学、PCR和Westernblot的方法测定NRK52E细胞TIEGmRNA、Smad2和Smad7mRNA、Smad2和Smad7蛋白表达水平。(2)TIEGsiRNA对AGEs介导NRK52E细胞Smad信号通路的影响:体外培养NRK52E细胞,分别转染psiRNA-TIEG和空载体,然后给予AGE—BSA刺激24h和48h,收集细胞,采用免疫细胞化学、PCR和Westernblot的方法测定转染NRK52E细胞TIEGmRNA、Smad2和Smad7mRNA、Smad2和Smad7蛋白表达水平。
结果:
(1)AGEs以时间依赖方式上调TIEGmRNA表达,48h达高峰;与刺激前和BSA对照组比较,刺激24h和48h明显上调Smad2和Smad7mRNA和蛋白表达。
(2)siRNA—TIEG可有效下调AGEs介导的TIEGmRNA表达。与空载体比较,siRNA-TIEG可下调AGEs刺激24h和48h后Smad2mRNA和蛋白表达,上调Smad7mRNA和蛋白表达。
结论:AGEs可介导NRK52E细胞TIEGmRNA异常高表达,TIEG基因沉默通过下调Smad2表达及上调Smad7表达,抑制AGEs介导的NRK52E细胞Smad信号通路活化。