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琥珀酸是一种二元羧酸,在三羧酸循环中产生,同时也是厌氧发酵的代谢产物之一。琥珀酸作为一种重要的化学合成前体,广泛应用于食品、化学和医药工业。微生物发酵法生产琥珀酸成为绿色工艺不仅是因为利用可再生资源,而且在发酵过程利用CO2减少了温室效应。因此,微生物发酵法生产琥珀酸是具有发展前景的方法之一。本论文对厌氧发酵琥珀酸产生菌的筛选、初步鉴定及发酵工艺进行了研究,主要研究内容和结果如下:建立一种快速经济的琥珀酸定性半定量分析方法化学荧光圈法。能满足菌种筛选过程对琥珀酸分析的要求,是经济、有效的分离和筛选产琥珀酸菌种的方法。研究了用于分析有机酸的HPLC条件。高效液相色谱仪为安捷伦1100,色谱柱为安捷伦ZORBAX SB-Aq柱(150 mm×4.6 mm,5μm),进样量10μL,流动相流速0.5 mL/min,检测波长210 nm,流动相:0.5 %乙腈、99.5 % 0.02 mol/L KH2PO4、调pH至2.0 (用磷酸调节),柱温30℃。从牛的瘤胃中分离得到产琥珀酸菌株JNUBE0709,初步发酵实验琥珀酸浓度为9.45 g/L,且该菌产生的杂酸种类相对较少,以甲酸、乙酸为主,因此将JNUBE0709作为本论文实验的出发菌。对产琥珀酸JNUBE0709基本生理生化性质鉴定,多数生理生化特征与琥珀酸放线杆菌相似。初步鉴定此菌种为产琥珀酸放线杆菌。通过单因素试验确定影响JNUBE0709发酵产琥珀酸三个显著因素,并进一步采用响应面分析显著因素的浓度范围。优化后最佳发酵培养基组成为(g/L):麦芽糖51.1,酵母膏24.5,KH2PO4 3,KCl 3,NaCl 3,MnCl2 0.06,MgCO3 40.4,pH自然。在优化条件下琥珀酸的产量达到33.45 g/L,比优化前的产量提高了74.49 %。研究了JNUBE0709发酵产琥珀酸的工艺条件,实验结果表明最佳培养条件为:100 mL厌氧瓶装液量25 mL,接种量为5 %,转速200 r/min,发酵温度为37℃,发酵周期48 h。