【摘 要】
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粪肠球菌（Enterococcus faecalis,E.faecalis）广泛的分布在自然环境中及人和动物消化道内的机会性致病菌,一旦感染,可导致动物和人多脏器的感染,是一种重要的人畜共患病原菌。在鸡群中,E.faecalis通常与败血症、心内膜炎、输卵管炎和淀粉样关节变性有关。从20世纪80年代以来,E.faecalis严重感染的发生率和病死率出现了明显的升高,并且因为E.faecalis具有
【基金项目】
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山东省自然科学基金项目（ZR2020MC181）； 山东省“双一流”奖补资金； 山东省绿色低碳畜牧业协同创新中心项目（SDE[2017]11）；
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粪肠球菌（Enterococcus faecalis,E.faecalis）广泛的分布在自然环境中及人和动物消化道内的机会性致病菌,一旦感染,可导致动物和人多脏器的感染,是一种重要的人畜共患病原菌。在鸡群中,E.faecalis通常与败血症、心内膜炎、输卵管炎和淀粉样关节变性有关。从20世纪80年代以来,E.faecalis严重感染的发生率和病死率出现了明显的升高,并且因为E.faecalis具有的固有耐药和获得性耐药,使得许多常用的抗菌药物在对E.faecalis感染进行治疗时失败,给养殖业带来严重的经济损失。本研究采集了泰安地区屠宰场内具有盲肠肿大病变特征的肉鸡盲肠内粪样,经过细菌的培养和分离纯化,应用MOLDI Biotyer微生物快速鉴定质谱仪鉴定出61株E.faecalis。应用Micro Scan walk Away-96细菌鉴定及药敏分析仪测定以上61株E.faecalis对11种抗生素的耐药性;通过PCR方法进行了E.faecalis的27种毒力基因和耐药相关基因的的分子检测;MLST方法进行了这61株E.faecalis的测序结果并对耐药菌株的亲缘进化关系进行了分析。试验结果如下:耐药谱分析发现,61株鸡源E.faecalis临床分离株对五类11种抗菌药物的耐药率依次为:红霉素E（96.72%）、四环素TE（96.72%）、链霉素S（72.13%）、庆大霉素CN（67.21%）、环丙沙星CIP（54.10%）、左氧氟沙星LEV（37.70%）、青霉素P（24.59%）、利奈唑胺LZD（18.03%）、达托霉素DAP（14.75%）、氨苄西林AMP（14.75%）和万古霉素VA（8.20%）。统计结果显示,61株分离菌多重耐药菌株检出率高达72.13%,优势耐药谱是E-TE-S-CN（19.68%）。毒力基因和耐药相关基因筛查发现,61株鸡源E.faecalis临床分离株12种毒力基因的检出率为:ace（57.38%）、asal（78.69%）、agg（75.41%）、cob（78.69%）、ccf（80.33%）、cpd（77.05%）、cyl A（16.39%）、cyl B（16.39%）、cyl M（16.39%）、、esp（11.48%）、hyl（6.56%）、mef A（8.20%）;15种耐药相关基因的检出率为:aac（6’）/aph（2’’）（67.21%）、ant（6）-I（0.00%）、aph（3’）-III（65.57%）、cat（26.23%）、erm B（95.08%）、gel E（59.02%）、gyr A（14.75%）、par C（60.66%）、tet K（0.00%）、tet L（90.16%）、tet M（91.80%）、tet S（1.64%）、van A（1.64%）、van B（0.00%）、Intl 1（77.05%）。检测到最多的毒力基因是ccf（80.33%）、asal（78.69%）和cob（78.69%）;耐药相关基因是erm B（95.08%）和tet M（91.80%）。MLST分型发现,61株鸡源E.faecalis临床分离株共呈现34个序列型。61个序列型形成了5个克隆复合体。各序列型所占比例依次为:ST631,11.5%（7株）;ST634,8.2%（5株）;ST4、ST480和ST758,6.6%（各4株）;ST10、ST32、ST195、ST257、ST314、ST363和ST968,3.3%（各2株）;ST16、ST33、ST38、ST49、ST59、ST69、ST80、ST143、ST169、ST198、ST251、ST256、ST262、ST265、ST452、ST476、ST479、ST650、ST689、ST736、ST862和ST991,1.6%（各1株）,优势序列型为ST631、ST634。综上所述,本研究通过对泰安地区鸡源E.faecalis进行分离鉴定、耐药性分析及耐药相关基因和菌株分型的检测,初步揭示了本地区鸡源E.faecalis的耐药情况及耐药相关基因与菌株类型的流行情况。我们的研究结果为指导临床合理使用抗菌药物及预防耐药菌传播提供了理论依据,为山东省家禽场食源性细菌和抗菌素耐药性的风险分析提供了流行病学数据。
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