论文部分内容阅读
随着科学技术的日新月异与生活水平的逐步提高,人们越来越重视农作物的安全问题。为实现对呕吐毒素的安全评估,保障人类健康,本文研究了呕吐毒素的检测方法,及其对人体细胞的毒害机制;为实现对转基因作物的有效监管,本文研究了转基因水稻科丰6号的特异性检测方法,具体内容如下:1.呕吐毒素的检测方法与代谢规律的研究:霉菌毒素对谷物的污染给全球农业带来巨大的经济损失。与此同时,人类和动物摄食污染的谷物后,其健康安全受到了严重的威胁。呕吐毒素是霉菌毒素中最常见的一种。为了有效、快速地检测人体细胞内该毒素的含量,本课题利用超高效液相色谱-飞行时间-质谱联用的技术(UPLC-TOF-MS),建立并验证了一种快速、便捷的方法来定性及定量地检测人体肝癌细胞(Hep G2)中的呕吐毒素。该方法的检测极限(LOD)为25ng/ml,定量极限(LOQ)为50ng/ml,且方法稳定性好,样品无需净化过程。再者,为了寻找有效的方法来缓解甚至解除呕吐毒素对人类及动物引起的疾病或中毒现象,课题也研究了该毒素的细胞毒性与遗传毒性。结果发现,Hep G2细胞对呕吐毒素培养24hours的半数抑制浓度(IC50)为4.25μM,且呕吐毒素通过氧化应激对细胞引发DNA损伤。初步试验还发现,呕吐毒素与同属单端孢霉烯族类T2毒素在细胞的遗传毒性上可能存在拮抗作用。本研究为相关部门制定呕吐毒素的安全评价管理体系,严格控制真菌毒素的污染,预防实际毒素病害、保障人类健康等奠定了基础。2.转基因水稻科丰6号特异性检测方法的研究:自第一批转基因水稻问世后,全球许多国家将转基因水稻品种进入试验田,并不断向市场推广。转基因水稻科丰6号是转bt基因与cpti基因的双价抗虫水稻。为了保障我国转基因农作物检测与管理制度的顺利开展与实施,本课题基于5’端的旁邻序列,建立了具有特异性高、灵敏度高、稳定性好的PCR定性定量检测方法。定性PCR与定量PCR进行检测的LOD分别为20拷贝与10拷贝。与此同时,课题还对转基因水稻科丰6号的定量PCR检测方法进行了实验室的内部协同验证。结果表明,该方法建立的定量标准曲线扩增效率高,线性相关系数好,混合样本的分析结果准确性高,精确性好。本研究进一步完善了该转基因抗虫水稻的检测方法体系,对促进其安全监管具有重要的意义。