瘢痕疙瘩属于病理性瘢痕,其特点是过度的皮肤纤维化和异常愈合的伤口瘢痕。具体发病机制尚不明确,目前尚无安全有效的治疗方法。神经生长因子（nerve growth factor, NGF）也称为神经营养因子,机体首先分泌合成神经生长因子前体（proNGF）,然后由蛋白酶分解为成熟的神经生长因子。NGF和proNGF在与高亲和力酪氨酸激酶受体（TrkA）低亲和力受体（p75NTR）进行结合的基础上来调控细胞的生死；在激活不同受体的情况下神经生长因子能够发挥完全相反的生物作用,在与受体p75NTR结合时可以促进细胞凋亡,相反与高亲和力受体TrkA结合时则可以激活NF-kB通路,从而促进细胞增殖。proNGF诱导细胞凋亡的能力明显强于NGF, proNGF与p75的结合力明显高于其与TrkA的结合力,proNGF是以形成proNGF-p75-sortilin配体受体复合物,激活信号传导通路,从而诱导细胞凋亡。其中在神经生长因子前体介导的细胞凋亡过程中Sortilin发挥了“开关作用”,控制IJP75NTR发挥关键作用,在本课题组前期的研究中发现,瘢痕成纤维细胞中辅助受体Sortilin的表达水平较正常皮肤成纤维细胞明显下降,其可能与瘢痕的成纤维细胞过度增殖有关,但其具体作用机制尚不清楚。瘢痕疙瘩成纤维细胞（KFs）过度增殖与proNGF（神经生长因子前体）有密切关系,但具体机制尚不清楚,并且proNGF受体在瘢痕疙瘩成纤维细胞和正常人皮肤成纤维细胞（NFs）中的表达是否存在差异,因此,在本研究中,我们对比观察Sortilin及p75在KF s和NFs中的表达差异,并通过基因工程技术过表达Sortilin,检测proNGF诱导KFs-Sortilin田胞凋亡的影响并探索相关机制。第一部分Sortilin在人瘢痕疙瘩成纤维细胞和正常皮肤成纤维细胞中的表达差异目的研究Sortilin在KFs和NFs中的表达差异,分析寻找瘢痕疙瘩疾病的发病机制,为瘢痕疙瘩的彻底有效治疗提供理论支持。方法收集正常人皮肤组织8例,瘢痕疙瘩8例,分别按照实验设计分组培养KFs和NFs。采用Real-Time PC R（实时荧光定量PCR）和蛋白免疫印迹（Western Blot）方法检测不同细胞中sortilin表达量的差异,同时利用流式细胞术及Caspase-3检测分析细胞凋亡情况。结果Real-Time PC R及Western Blot检测显示在nRNA水平和蛋白水平上Sortilin在KFs和NFs中均呈阳性表达,但是Sortilin在KFs中表达量较NFs中表达量显著降低,p<0.05,其差别有统计学意义。而p75在KFs和NFs中的表达无统计学差异。结论Sortilin在瘢痕疙瘩成纤维细胞中表达明显减少,可能与瘢痕疙瘩成纤维细胞过度增殖有关。第二部分过表达Sortilin促进proNGF诱导的瘢痕疙瘩成纤维细胞凋亡目的研究Sortilin在神经生长因子前体（proNGF）诱导瘢痕疙瘩成纤维细胞凋亡中的影响,并分析其信号转导通路及作用机制,为临床上对瘢痕疙瘩的干预治疗提供理论依据。方法我们以KFs和NFs为研究对象。通过基因工程方法构建过表达Sortilin质粒,并通过慢病毒转染培育过表达Sortilin的瘢痕疙瘩成纤维细胞,然后利用流式细胞术及Caspase-3分析检测各组细胞凋亡情况；最后通过免疫蛋白印迹分析其凋亡信号蛋白表达情况,以明确其诱导凋亡的信号转导机制。结果成功构建过表达Sortilin质粒,转染后成功培育筛选出过表达Sortilin的瘢痕疙瘩成纤维细胞（KFs-Sortilin）的稳定细胞株,KFs-Sortilin凋亡显著增强,并且在有proNGF存在是KFs-Sortilin细胞凋亡更加显著,其差异有统计学意义。通过免疫蛋白印迹方法分析Sortilin参与凋亡的信号转导通路途径,结果显示PI3K/Akt/NF-κB信号通路蛋白表达明显降低,Bax蛋白的表达明显增加,其差异有统计学意义。结论过表达Sortilin明显促进proNGF诱导的细胞凋亡。诱导细胞凋亡途径是通过抑制PI3K/Akt/NF-κB信号通路,并且Bax的表达增加。总之,我们的研究表明,通过基因工程技术过表达Sortilin后,proNGF诱导的KFs细胞凋亡显著增强,其具体机制可能是通过增加Bax的表达,抑制PI3K/Akt激活NF-κB信号通路,总之我们通过本实验研究成功培育出过表达Sortilin的瘢痕疙瘩成纤维细胞（KFs-Sortilin）。并发现了一个瘢痕疙瘩疾病的基因治疗新的靶点：Sortilin。