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细胞程序性死亡主要分为凋亡、坏死和自噬性细胞死亡。这些不同的细胞死亡形式在不同的生命过程中均发挥着重要作用。细胞程序性死亡有着严格的调控过程。本文希望通过发现这些调控过程中的新蛋白以及研究调控蛋白的新功能,从而进一步阐释细胞程序性死亡的机制。
本文第一部分研究了自噬性细胞死亡导致的胚胎致死和自噬过程的调控。我们发现WASH基因敲除会引起胚胎致死,在胚胎发育的第7.5天(E7.5)会出现细胞死亡,但这种死亡并非凋亡,而是类似于自噬性的死亡。在WASH缺失的MEF细胞和WASH低表达的HeLa细胞中都出现了明显的自噬特征。WASH在自噬发生过程中能够与LC3、Atg16和p62有很好的共定位,与自噬起始阶段的蛋白DFCP1和自噬降解阶段的蛋白LAMP1没有定位,提示WASH调节自噬发生在自噬小体的延伸和成熟阶段。通过酵母双杂交实验,我们发现WASH能够与Beclin1相互作用,同时证明了WASH存在于Beclin1-Vps34复合物中。我们发现WASH能够负调节Beclin1-Vps34复合物的活性。WASH能够抑制Beclin1的Lys437泛素化,而这种泛素化对于Beclin1-Vps34的活性调节具有重要作用。本文揭示了WASH蛋白参与的一种新的自噬调节的动态平衡过程,而这种平衡对于早期胚胎发育至关重要。
本文第二部分研究了颗粒酶M引起肿瘤细胞凋亡的分子机制。我们发现颗粒酶M能引起caspase的级联活化,但caspase的活化并不依赖于Bid的切割和细胞色素c的释放。颗粒酶M引起的caspase活化和细胞凋亡在caspase-8低表达以及caspase-8缺失的肿瘤细胞中有明显的减弱,说明caspase-8在颗粒酶M介导的caspase级联活化过程中发挥了起始者的作用。我们也发现FADD是颗粒酶M的生理底物。颗粒酶M能够在生理情况下切割FADD,切割位点是Met196。FADD的切割片段(tFADD)自身具有很强的相互作用,能够募集并激活caspase-8。从而引起下游caspase活化,最终导致细胞凋亡。本文发现了FADD蛋白调控细胞凋亡的新机制,为研究肿瘤细胞凋亡提供一种新的模型。