CO2对卵巢癌裸鼠移植瘤生物学行为及顺铂敏感性的影响

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目的探讨体外模拟的二氧化碳(CO2)气腹环境对人卵巢癌细胞(SKOV3)裸鼠皮下移植瘤生物学行为的影响,以及CO2气体环境作用后该移植瘤对化疗药物敏感性的变化。方法模拟CO2气腹腹腔镜环境,建立体外气腹模型,将人卵巢癌细胞株(SKOV3)暴露于12mmHgCO2环境下分别持续1h(a组)、3h(b组),对照组(c组)细胞放入CO2培养箱中常规培养。收集3组细胞并吹打成细胞悬液。将裸鼠配对后随机分为A、B、C 3组(每组10对),分别于各组裸鼠左侧肩胛部皮下接种上述对应a~c组细胞悬液(0.1mL),约含肿瘤细胞为6.0x106个。明显成瘤后3d(肿瘤长至约100mm3),将每组的10对裸鼠再随机分为1、2两组。A1、B1、C1组(用药组)腹腔注射顺铂(DDP)5mg/kg,0.5mL,每周1次,共3周:A2、B2、C2组(非用药组)仅腹腔注射生理盐水,0.5mL,每周1次,共3周。检测肿瘤生长,绘制肿瘤生长曲线。停药后次日脱臼处死全部裸鼠并解剖,依次探查腹腔和盆腔内脏器有无肿瘤转移、有无腹水及淋巴结情况并记录,完整剥离肿瘤组织并测量移植瘤的体积和重量,采用免疫组化法检测增殖细胞核抗原(PCNA)、血管内皮生长因子(VEGF)、黏附分子CD44v6和抑癌基因nm23-H1在各组移植瘤中的表达。采用SPSS11.5软件进行统计分析。皮下移植瘤体积和重量以x±s表示,采用单向方差分析和析因设计多因素方差分析,多重比较采用LSD检验,等级资料多组间比较采用Kruskal-Wallis H检验,两组间比较采用Mann-WhitneyU检验,相关性检验采用Spearman相关分析法,P<0.05为差异有统计学意义。结果①各组裸鼠均于接种后10天明显成瘤,成瘤率100%,且CO2处理组的裸鼠明显成瘤后瘤体均出现出血坏死。②CO2气体处理组的皮下移植瘤增殖速度明显快于对照组(P<0.01),CO2作用3小时组显著快于1小时组(P<0.01)。③CO2处理组的移植瘤对DDP的敏感性较对照组显著降低(P<0.01)。CO2和顺铂两因素间有交互作用(P<0.05)。④探查盆腹腔脏器后,各组裸鼠均未查见有肿瘤转移灶、腹水及肿大淋巴结。⑤CO2处理组肿瘤组织的PCNA和VEGF蛋白表达显著高于对照组(P<0.01),CO2处理1h和3h组间PCNA和VEGF蛋白表达的差异无统计学意义(P>0.05)。用药组PCNA和VEGF蛋白表达明显低于非用药组(P<0.05);PCNA和VEGF蛋白表达之间呈正相关(rs=0.792,P<0.01)。C02处理组与对照组间移植瘤的CD44v6和nm23-H1蛋白表达的差异无统计学意义(P>0.05);用药组与非用药组间移植瘤的CD44v6和nm23-H1蛋白表达的差异也无统计学意义(P>0.05)。CD44v6和nm23-H1蛋白表达之间呈负相关(rs=-0.791,P<0.01)。结论①CO2气体对人卵巢癌细胞(SKOV3)裸鼠皮下移植瘤的增殖有促进作用。②CO2气体环境作用后,移植瘤对DDP的敏感性下降。③CO2气体对肿瘤侵袭转移影响不大。意义①CO2气体对人卵巢癌细胞(SKOV3)裸鼠皮下移植瘤的增殖有促进作用,且CO2作用时间与肿瘤细胞增殖有关。提示我们在临床实践中应熟练掌握腹腔镜手术操作技术,缩短手术过程,减少CO2气腹存留时间,降低CO2气体本身对恶性肿瘤细胞的不良作用。②CO2气腹作用后早期应用DDP腹腔化疗对抑制肿瘤生长有较好的防治作用,提示我们在临床实践中可在术中术后早期应用腹腔化疗,减低腹腔镜手术中CO2气体的不良作用。
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