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木薯细菌性枯萎病是由地毯草黄单胞木薯萎蔫致病变种(Xanthomonas axonopodis pv.manihotis,Xam)侵染引起的世界性病害。目前,该病害为国内木薯生产上最为严重的病害,是我国木薯产业持续健康发展的限制因素之一。国内外关于该病致病机理方面的研究不多。本研究利用感病木薯品种——桂热4号为转化子筛选供试材料。采用剪叶法对前期建好的Xam菌株的10510个Tn5转座子插入转化子进行初筛和复筛,获得致病力丧失转化子61个、致病力减弱转化子54个。经进一步分子分析和生理生化特性检测发现,所有致病力丧失或减弱转化子均为Tn5插入突变体,且大部分为单拷贝插入;Xtn102-01、Xtn199-57和Xtn142-67三个突变体的三种胞外蛋白酶、纤维素酶和淀粉酶活性出现减弱,且减弱趋势相同。对其中的29个致病力丧失或减弱突变体T-DNA插入模式分析发现,Tn5转座子在菌株GX11中的插入位置偏好于低GC含量区(GC含量为49%-50%插入最多);插入后均会形成9 bp的正向重复序列,且重复序列的首位上鸟嘌呤的出现概率较高,末位上胞嘧啶的出现概率较高;Tn5转座子倾向于插入基因的编码区内,插入方向没有偏好性。对10个致病力丧失或减弱突变体的T-DNA插入基因进行克隆,并获得alaTXam、aslXam、ClSXam、kdpAXam、traFXam、xam73和xam5926等7个基因的非极性敲除突变株,其中的am7341和Xam5926基因敲除突变株生长速率明显减缓,但仅有aslXam基因敲除突变株(GX11△As1)的致病性完全丧失。进一步构建Aslx基因敲除突变株(GX11△As1)的互补株(GX11△As1+As1),GX11△As1+As1突变株的致病力得到了恢复,但略弱于野生型菌株。胞外酶活性、生长速率、游动性和胞外多糖分泌等生物学特性检测发现,野生型菌株、敲除突变株GX11△As1及其互补菌株GX11△As1+As1的胞外蛋白酶、淀粉酶和纤维素酶的活性没有发生改变,生长速率和游动性无显著差异,但敲除突变株GX11△As1的胞外多糖分泌量明显降低。