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羊传染性脓疱病是由羊传染性脓疱病毒（Orf virus, ORFV）感染引起绵羊、山羊等中小反刍动物的一种急性、高度接触性人兽共患传染病。ORFV具有高度的嗜上皮性，主要侵害绵羊或山羊的口腔黏膜以及乳房、阴部等无毛或少毛区域。此外，ORFV具有较强的抵抗力，羊群一旦被感染很难进行清除，可持续多年对羊群造成危害。目前，用于ORFV检测的方法主要包括有病毒的分离鉴定、电镜负染观察、ELISA、PCR、Real-time PCR、LAMP、间接免疫荧光等方法，对于基层检测而言，这些方法存在有费时、费力、需要专业的实验技术人员及特殊的仪器设备等缺点，因此导致其在临床上的应用受到一定的限制。鉴于此，急需建立一种操作简单、快捷方便的ORFV检测方法用于基层现场检测。本研究利用蔗糖密度梯度离心法纯化ORFV，免疫Balb/c小鼠，取其脾细胞与SP2/0细胞进行融合，经间接ELISA方法筛选阳性杂交瘤细胞，成功筛选获得3株杂交瘤细胞，分别命名为5A5、6F2、7A3。经ELISA检测，三株单抗的效价在1:12800～1:51200之间；亚型鉴定证实3株单抗均为IgG1；3株杂交瘤细胞染色体条数为92～103条；经ELISA和Western blot分析，3株单坑主要是针对ORFV-B2L蛋白；经间接免疫荧光（IFA）方法鉴定，3株单克隆抗体均能与ORFV结合，特异性良好。此外，成功制备获得兔抗ORFV多克隆抗体。在成功制备ORFV单抗和多抗的基础上，结合胶体金免疫层析技术建立了用于ORFV检测的胶体金快速诊断试纸法。采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金，电镜下观察金颗粒大小在30nm左右；通过pH梯度测定确定胶体金与5A5单抗结合的最佳pH值为8.2；通过蛋白梯度测定最佳结合浓度为40.6μg/mL；用金标单抗包被玻璃纤维膜，分别喷点兔抗ORFV多抗、羊抗小鼠IgG于硝酸纤维膜检测线、质控线，组装试纸条。用组装好的试纸条对不同浓度的ORFV进行检测，结果显示，最低可检测6.25μg/mL的病毒，且与SPPV、VSV、FPV、FMDV等病毒无交叉反应。稳定性检测结果显示，将组装好的试纸条分别放置在4℃和室温条件下，其存放时间均能达到4个月。在成功制备出用于ORFV抗原检测胶体金快速诊断试纸条的基础上，应用其对本实验室搜集保存的165份疑似ORFV感染病料样本进行检测，阳性率为20.6%；将该方法与实验室建立的PCR及LAMP检测方法进行对比分析，符合率分别为94.4%和89.5%。上述结果显示，本研究所制备的ORFV胶体金快速诊断试纸法具有特异性好、敏感性高、重复性好、稳定性高等优点，并因其具有操作简便、快捷等优点，可被广泛用于基层现场检测，因此对于ORFV的早期诊断具有重要意义。