百合是世界著名的球根花卉,具有自然休眠特性。百合鳞茎休眠的研究目前主要集中在低温解除休眠过程中的形态变化和生理生化变化方面,而分子水平的研究尚是空白。本研究以麝香百合(Lilium longiflorum)为试材,构建低温解除百合鳞茎休眠过程中的抑制性差减cDNA文库,并通过EST序列分析来预测文库中差异表达基因的功能,筛选出了若干个可能参与百合鳞茎休眠解除的相关基因,为进一步研究鳞茎休眠机制奠定了基础。主要研究结果如下：1.麝香百合鳞茎经7℃冷藏49-56d休眠解除；2.改进的CTAB法提取百合鳞片RNA,将样品量从0.2g减少到0.1g,β-巯基乙醇的含量从2%提高到4%,有效抑制了内源RNase活性及酚类物质的氧化,成功地从百合鳞片中提得高质量的总RNA；3.利用抑制性差减杂交技术(SSH)构建了正反cDNA文库。经斑点杂交筛选、测序,正库获得了177条有效EST片段,130个unigenes。经BLASTx和BLASTn比对发现92个unigenes有显著相似性,占unigenes总数的70.77%,其中63个具已知或推测功能,占unigenes总数的48.46%,29个比对上但功能未知,加上38个unigenes比对无显著相似性,总共67个unigenes可能为未经报道的新基因,占unigenes,总数的51.54%。同样反库获得了233条有效EST片段,145个unigeneso经BLASTx和BLASTn比对发现120个unigenes有显著相似性,占unigenes总数的82.76%,其中86个具已知或推测功能,占unigenes总数的59.31%,34个比对上但功能未知,加上25个unigenes比对无显著相似性,总共59个unigenes可能为未经报道的新基因,占unigenes,总数的40.69%。4.休眠的解除是一个复杂的过程,涉及到物质代谢、信号传导、抗逆、转录、能量代谢和蛋白合成等。本实验筛选到的可能参与低温解除百合休眠的基因主要有Ca2+结合蛋白基因、Lea蛋白基因、质膜内在蛋白基因、活性氧清除相关基因、糖代谢相关基因、F-box蛋白基因、锌指蛋白基因和Cor基因等。