目的:近些年,我国黑果腺肋花楸的种植区域逐渐增多,但由于气候环境、地理位置等不同,导致该药材的质量存在一定差异。目前黑果腺肋花楸果实质量评价体系尚未建立,其质量控制不佳,致使其药食两用的功能特性受到了一定的限制。故本实验选取11批同种不同产地黑果腺肋花楸果实为研究对象,对其进行性状、显微鉴别,水分、灰分、浸出物含量测定,并测定其多酚、黄酮类成分含量及进行指纹图谱研究,以期建立黑果腺肋花楸果实质量评价体系,为其深入研究及未来进一步应用推广提供有效的参考依据,同时为后续药效学研究奠定基础。材料与方法:1材料:本课题实验材料为同种11批黑果腺肋花楸果实,经辽宁中医药大学康廷国教授鉴定为蔷薇科腺肋花楸属黑果腺肋花楸的果实,入药部位为其果实,凭证标本避光保存于辽宁中医药大学中医药创新工程技术中心304实验室。2方法:2.1本实验通过2015版中国药典第一部中的直接观察法、游标卡尺测量法对不同产地的黑果腺肋花楸果实及种子进行性状鉴别。依托2015版中国药典第四部中通则,使用粉末制片法观察其果实的显微特征,使用烘干法、灰分测定法、酸不溶性灰分测定法、冷浸法分别对其果实的水分、灰分、酸不溶性灰分、水溶性浸出物、醇溶性浸出物的含量进行测定。2.2以多酚提取率为评价指标,设计提取溶剂、无水乙醇提取分数、提取时间、料液比、提取温度5个单因素,依据单因素考察筛选出主要因素,并采用L9(3)4正交试验对黑果腺肋花楸果实中总多酚提取工艺进行优化。以总黄酮提取率为评价指标,设计无水乙醇提取分数、提取时间、料液比、提取温度4个单因素,依据单因素考察筛选出主要因素,并采用L9(3)4正交试验对黑果腺肋花楸果实中总黄酮提取工艺进行优化。同时采用紫外分光光度法对11批黑果腺肋花楸果实样品中的总多酚和总黄酮含量进行测定。此外采用HPLC法对11批黑果腺肋花楸果实中的指标性成分矢车菊素-3-O-葡萄糖苷进行含量测定。2.3采用HPLC法对11批黑果腺肋花楸果实样品进行指纹图谱研究,使用2012版中药指纹图谱相似度评价软件进行相似度评价,并对评价结果进行聚类分析。结果:1.黑果腺肋花楸果实新鲜时为浆果,呈圆形,其横径大小0.7-1.3 cm,纵径大小0.8-1.2 cm,表面及果肉、种子颜色均呈黑紫色或暗红色,具有光泽,顶端扁圆,有花柱,褐色,顶部含有突起的花柱基,基部具有棕红色果柄痕,常留果柄,1-2.5 cm。气微,味道略酸涩。黑果腺肋花楸果实干燥后呈椭圆形,黑棕色,具有不规则纵皱纹,质地坚硬,内含种子,呈肾形,棕褐色,4-8粒,横径3-4.5 mm,纵径0.1-0.2 mm。2.黑果腺肋花楸果实粉末红棕色,外果皮薄,红棕或紫棕色,多见红棕色块状物,具有木栓细胞,清晰可见油点,整齐排列,表面上可见角质线纹,细胞壁呈念珠状增厚;薄壁细胞,紧密排列在一起;种皮外层石细胞略长或呈多角形,壁略厚,胞腔略小,腔内含有黄棕色物质;种皮内层石细胞呈类圆形,卵圆形等,壁相对较薄,胞腔相对较大,具有密列细壁孔,此外还具有胚乳细胞、螺纹导管。3.11批样品中水分含量范围为78.49%-82.65%,平均含水量在81.03%。灰分含量在2.59%-4.66%,平均含量为3.72%,酸不溶性灰分在0.45%-1.18%,平均含量为0.78%,水溶性浸出物含量在49.71%-61.19%,平均含量为57.08%,醇溶性浸出物含量为55.71%-69.99%,平均含量为63.83%。4.本实验通过正交试验得出黑果腺肋花楸果实中总多酚提取的最优方法为乙醇分数70%,料液比1:50(g/m L),提取温度55℃,提取时间75 min。在此方法下测得其总多酚平均提取率17.88%,RSD为1.27%。对11批产地黑果腺肋花楸果实中总多酚进行含量测定,发现不同产地间总多酚含量存在一定差异,总体上看其范围在17.47±1.17%-19.10±1.56%,其中辽宁沈阳的平均含量最高,为19.10%,辽宁鞍山最低,为17.47%。5.本实验正交试验结果得出黑果腺肋花楸果实总黄酮的最佳提取工艺为乙醇分数60%,料液比1:40(g/m L),提取温度55℃,提取时间80 min。运用上述最优提取方法进行验证性实验平行测定三次,测得黄酮平均提取率0.102%,RSD为0.09%。对11批产地黑果腺肋花楸果实中总黄酮进行含量测定,发现不同产地间总黄酮含量存在一定差异,总体上看其范围在0.04±0.42%-0.14±0.49%,其中辽宁沈阳的平均含量最高,为0.14%,辽宁大连最低,为0.04%。6.不同产地黑果腺肋花楸果实中矢车菊素-3-O-葡萄糖苷含量存在一定的差异,在0.34%-0.87%范围内,其中辽宁沈阳的含量最高,为0.87%,吉林白山的含量最低,为0.34%。7.本实验中11批黑果腺肋花楸果实样品的共有峰17个,并通过标准品指认出3、9、10、12,13号峰分别为没食子酸、绿原酸、咖啡酸、矢车菊素-3-O-葡萄糖苷,表儿茶素。其指纹图谱相似度均在0.90以上,结果显示依据本实验项下方法对黑果腺肋花楸果实样品进行指纹图谱分析,具有较好的相似性。结论:1.本实验首次对黑果腺腺肋花楸果实进行显微鉴别,水分、灰分、浸出物含量测定研究,初步建立了黑果腺肋花楸果实质量评价体系,填补其质量评价的空白,为其研究及推广使用提供了有效的参考依据。2.利用超声法优化其主要成分多酚、黄酮的提取工艺,在提取溶剂中加入0.2%盐酸溶液,大大提高了其多酚含量,结果显示该法简单、高效、重复性好,可适用于其有效成分提取。3.经测定11批黑果腺肋花楸果实中辽宁沈阳产地样品中多酚、黄酮、花青素类代表成分矢车菊素-3-O-葡萄糖苷含量均最高,故在药材产地的选择上可以以辽宁沈阳为参考,这可能与沈阳独特的地理位置、土壤条件、气候环境有关,但其中具体原因需要进一步研究。4.首次建立了黑果腺肋花楸果实HPLC指纹图谱分析方法,且其精密度、稳定性、重复性、相似度均在规定范围之内,对于初步评价不同产地黑果腺肋花楸果实的质量优劣具有重要的指导意义。5.经与其他已报道的文献研究显示,黑果腺肋花楸果实中多酚含量及花青素代表成分矢车菊素-3-O-葡萄糖苷的含量均较国内其他果实类含量高,这可能是其发挥强抗氧化性的原因之一,故黑果腺肋花楸果实具有进行进一步深入研究的重要意义,这可以为其进一步开发及推广奠定坚实的基础。6.初步建立了黑果腺肋花楸果实的质量评价体系,对其规范化使用具有重要的意义。