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人血清白蛋白(HSA)是一种具有重要生理功能、在临床医学实践中具有广泛用途的医用蛋白质。临床医疗中主要用于手术输血和危重病人补液,治疗烧伤休克、发烧、水肿、低蛋白血症和红细胞过多症等,是临床上一种重要药物[1].
本研究选用人血清白蛋白(HSA)为实验对象,利用免疫磁性微球(IMMS)技术对其进行分离纯化研究。
首先制备了抗-HSA(Anti-HSA-IgG)血清,经分级盐析、DEAE-32cellulose和Sephadex-G25葡聚糖柱精制IgG抗体。
采用分散聚合法制备了粒径为3.6-10μm的聚苯乙烯磁性微球,以其为载体考察抗体的致敏条件和免疫磁性分离条件。结果表明聚苯乙烯磁性微球经EDC(碳化亚胺)活化后,BSA偶联于聚苯乙烯磁性微球的偶联量达到576±40.3μg/mg,通过分子量换算对兔抗人HSA抗体的偶联量大约为1270μg/mg.
采用上述聚苯乙烯磁性对HSA进行3次免疫磁性分离,以兔抗人血清白蛋白抗体(rabbitanti-HSAantibodies)作为捕获抗体,将酶联羊抗人血清白蛋白抗体(goatanti-HSA-HPRantibodies)作为检测抗体,建立起双抗体夹心酶联免疫法(SandwichELISA),检测未被偶联HSA量,而计算出磁性免疫微球对HSA的回收率。其三次回收率分别为86.5±3.7%、69.0±0.6%和40.8±0.8%.SDS-PAGE凝胶电泳分析纯度为95%。
本研究结果表明,免疫磁性微球技术可直接从人血清样品中一步纯化得到高纯度的目的蛋白HSA,操作简便、快速,为HSA的分离纯化提供了一条新的途径。