基于长寿命稀土荧光标记物的时间分辨荧光生化分析技术可有效消除来自生物样品的背景荧光,使得其测定灵敏度得以显著提高,已广泛应用于临床医学诊断和生命科学领域。然而,受稀土配合物发光机理的限制,大多数稀土荧光生物标记物都需使用具有潜在毒性的紫外光作为激发光源(小于360nm),一定程度上限制了时间分辨荧光生化分析技术的广泛应用。因此,研制具有长波长激发性质、荧光量子产率高、稳定且水溶性好的长寿命稀土荧光标记物对时间分辨荧光生化分析技术的发展与进步具有重要的理论与实际意义。本研究设计合成了分别基于新型配位体2’-(N,N-二乙基苯胺基-4-基)-4’,6’-二(3"-甲氧羰基吡唑-1"-基)-1’,3’,5’-三氮唑(简称MCPBT)和2’-(N,N-二乙基苯胺基-4-基)-4’,6’-二(3"-羧基吡唑-1"-基)-1’,3’,5’-三氮唑(简称DPCT)的两种新型三元铕荧光配合物,然后通过反相微乳液共价键和法制备了内部共价键合了铕(Ⅲ)配合物的两种荧光硅胶纳米粒子。所制备的第一种纳米粒子激发峰波长可达384nm,荧光寿命长(369μs)、荧光量子产率较高(25.3%)、粒径均匀(38±3nm)。所制备的另一种纳米粒子的最大激发波长为337nm,激发窗口可延伸至450nm处,在400nm光激发下仍能发出一定强度的荧光。此纳米粒子的荧光寿命长(402μs)、荧光量子产率较高(32.0%),粒径均匀(34±4nm)。两种纳米粒子单分散性好、表面都带有氨基可直接标记生物分子。为了验证所制备的纳米粒子可以作为一种生物标记探针在时间分辨荧光生化测定中使用,本研究进一步制备了纳米粒子标记的链霉亲和素,并将之成功地用于环境病原微生物鼠隐孢子虫的免疫荧光染色及时间分辨荧光成像测定。研究表明,制备的长波长激发纳米铕荧光粒子可作为新型的生物标记探针用于时间分辨荧光生化测定。