新人参二醇的血浆药代动力学研究与初步安全性评价

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新人参二醇是通过酸降解人参总皂苷提取得到的化合物。通过光谱数据和X射线单晶衍射数据确定其结构为达玛烷-(E)-20(22)-烯-3β,12β,25-三醇。前期药理学研究表明此化合物可以改善多种拟痴呆模型动物的学习记忆功能,在抗老年痴呆方面具有良好的应用前景。根据化合物结构特点和理化性质,建立了测定大鼠血浆中新人参二醇的液质联用检测方法(UPLC-MS/MS)。经过色谱条件和质谱条件优化,采用甲醇沉淀蛋白法对血浆中的待测物新人参二醇和内标人参二醇进行提取,氮气流吹干后残留物用90%甲醇进行复溶,用Waters公司BEH C18柱(50mm×2.1mm,1.7μm)进行色谱分离,流动相为0.2%甲酸水溶液/甲醇(20:80, v/v),流速为0.25mL/min;质谱检测系统采用ESI源(电喷雾离子源),通过正离子检测方式,在MRM(多重反应监测)模式下,新人参二醇和人参二醇的定量离子对分别为m/z461.6→m/z425.6和m/z461.5→127.0。为了考察血浆样品分析方法的专属性、准确度、精密度、提取回收率、基质效应和稳定性等,本试验对该方法进行了完整的方法确证。结果表明:新人参二醇在大鼠血浆中的线性范围为5160ng/mL,最低定量下限(LLOQ)为4ng/mL;线性范围内,血浆中无内源性物质干扰;质控样品的高、中、低三种浓度日内和日间准确度均小于6.35%,精密度在97.4%至104.5%之间;样品前处理方案能够对待测物新人参二醇和内标人参二醇进行有效的提取,且基质效应较小,提取回收率高、中、低浓度分别为92.3,94.5和95.4%;在试验中设定的各种考察条件下,新人参二醇均有较好的稳定性。方法确证结果表明,此分析方法符合SFDA有关规定,方法的灵敏度高,专属性强,样品处理程序简单,测定的药物浓度准确、可靠,其测定误差满足药代动力学研究方法学的要求限度。实验应用建立的分析方法测定给药后不同时刻新人参二醇的血药浓度,根据以上数据绘出血药浓度-时间曲线并计算相关药代动力学参数,并对主要药代动力学参数进行分析。六只大鼠灌胃给予100mg/kg的新人参二醇后,血浆中Tmax为1.9±0.8h,Cmax为52.39±16.55ng/mL,t1/2为9.61±3.98h,AUC0-t为448.96±181.16ng/mL h,MRT(0–t)为7.47±1.67h。药时曲线呈明显双峰现象,导致双峰现象的原因可能为肠肝循环和/或胃肠消化道的不均一吸收。大鼠1日内给予最大耐受剂量6g/kg,未出现死亡及病理变化,说明该药无急性毒性作用。微核实验中,各剂量组大鼠各项生理生化指标和病理学检查均未见明显变化,初步表明该药安全无毒。
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