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高良姜(Alpinia officinarum Hance)为姜科多年生草本植物的干燥根茎,具有温胃散寒,消食止痛功效。高良姜药材中含有多种黄酮类成分,是反映高良姜主要功效的活性成分。近年文献报道高良姜黄酮类化合物具有多种药理和药效活性,如抗溃疡、抗腹泻、利胆、镇痛、消炎、抗缺氧、抗血栓形成等。因此,开展从高良姜中高效提取分离获得高纯度的黄酮类化合物并适合工业化生产的分离技术是很有必要的,尤其可促进高良姜功效的提高和价值的利用。
本论文以高良姜超临界萃取药渣为原料,应用大孔吸附树脂对高良姜粗提物中的黄酮类化合物进行分离纯化,探讨各影响参数对分离纯化效果的影响。在通过大孔吸附树脂分离纯化得到高纯度高良姜黄酮类化合物的基础上,采用薄层色谱、高效液相色谱对高良姜黄酮类化合物纯化品所含组分进行定性分析,利用制备型高效液相色谱进行组分分离,并将所获得的高良姜黄酮类化合物各组分进行结构鉴定。研究结果显示：
采用紫外分光光度法测定高良姜黄酮类化合物含量。结果表明,高良姜黄酮类化合物紫外最大吸收波长为360nm。线性回归方程式为A=53.48C-0.003,相关系数R=0.9999,准确度、精密度、重现性,回收率的相对标准偏差均小于3％,可以作为高良姜黄酮类化合物含量的快速测定。
采用大孔吸附树脂分离纯化高良姜黄酮类化合物,并考察分离纯化工艺参数。结果表明,HPD-600型大孔吸附树脂适合分离纯化高良姜黄酮类化合物,纯化工艺参数为上样浓度0.8mg/mL,上样流速2BV/h,洗脱剂乙醇浓度85％,洗脱流速0.5BV/h,采用该工艺分离纯化高良姜黄酮类化合物,纯度达98.56％,得率达73.70％。并对纯化后的高良姜黄酮类化合物进行抗消化性胃溃疡实验,结果表明,高良姜黄酮纯化品各剂量组均可使大鼠应激性溃疡和幽门结扎溃疡的溃疡指数明显减少(P<0.0l～0.001),高良姜黄酮纯化品对消化性胃溃疡有明显防治作用,且呈剂量依赖性地抑制。
利用薄层色谱法和高效液相色谱定性分析判断高良姜黄酮类化合物含有2个组分,可能为高良姜素和山奈素。在分析色谱条件的基础上,采用制备型高效液相色谱分离出高良姜黄酮类化合物各组分单体。并经优化确立了制备型高效液相色谱分离高良姜黄酮类化合物各组分的色谱条件为色谱柱:Venusil XBP-C18液相色谱柱(210mm×250mm,10.0μm);流速：7.0mL/mim;检测波长：360nm;进样量：700μL;柱温：常温；流动相：甲醇:水(乙酸)=58:42(0.6％)。
采用紫外光谱、红外光谱、核磁共振光谱和质谱等现代分析方法对分离得到的高良姜黄酮类化合物组分进行结构鉴定,分析结果表明,组分I的分子量为270,与高良姜素的分子量相同,组分II的分子量为300,与山奈素的分子量相同；二个组分的紫外光谱图、红外光谱图、1H核磁共振光谱、13C核磁共振光谱和质谱图分别与高良姜素标准品和山奈素标准品的谱图基本相同,由此可以确定高良姜黄酮类化合物纯化品主要由高良姜素和山奈素组成。
本论文的研究显示采用大孔吸附树脂纯化高良姜中黄酮有效活性成分,工艺简单,分离效率高,为产业化提供依据和基础数据。采用现代分析分离技术对高良姜中黄酮有效活性成分进行鉴定为进一步研制高良姜中药新药和保健品的开发提供了技术支持。