论文部分内容阅读
背景及目的胶质瘤是中枢神经系统最常见的原发性恶性肿瘤,具有很强的侵袭性、增殖速度快和高复发率。胶质瘤干细胞(glioma stem cells,GSCs)的存在是胶质瘤发生和复发的根源,治疗胶质瘤的关键是要彻底切除肿瘤的同时全面消除胶质瘤干细胞。根据胶质瘤干细胞表面标志物表达的不同,可将GSCs分成不同的亚群,目前针对不同亚群GSCs的生物学特性研究相对较少。在过去的几十年中,越来越多的研究已经证实,微小RNA(mi RNAs),一类非编码RNA,在人脑胶质瘤中发挥至关重要的作用。Micro RNA通过对靶向m RNA的降解和翻译水平的调控,从而在肿瘤的发生发展中起着癌基因和抑癌基因的作用。mi RNA可参与调控胶质瘤细胞的增殖、凋亡、侵袭、血管形成和耐放化疗性,对GSCs的自我更新和分化同样具有调控作用。本实验室近年培养出了一株表达A2B5+/CD133-的胶质瘤干细胞株,将其命名为SHG-139s。通过基因芯片技术筛选发现,mi R-218-5p在SHG-139s中表达显著降低,查阅相关文献研究已证实,mi R-218-5p的成熟体mi R-218在胶质瘤中呈低表达,上调mi R-218的表达后能显著促进CD133+胶质瘤干细胞的分化,抑制胶质瘤细胞的增殖及侵袭性。针对mi R-218-5p在A2B5+/CD133-人脑胶质瘤干细胞中的作用目前国内外仍未见相关报道。因此推测,mi R-218-5p对A2B5+/CD133-人脑胶质瘤干细胞(SHG-139s)的干细胞特性维持及侵袭能力可能起着重要的调控作用。研究方法收集2008年5月-2013年1月苏州大学附属第一医院神经外科手术切除的经病理证实的人脑胶质瘤组织标本53例,脑外伤减压术切除的非瘤脑组织6例,培养5例胶质瘤细胞株,3例胶质瘤干细胞株,实时荧光定量PCR(q RT-PCR)检测人非瘤脑组织、人脑胶质瘤组织、人脑胶质瘤细胞株和人脑胶质瘤干细胞株中mi R-218-5p的表达;构建mi R-218-5p过表达及RNA干扰(RNAi)的慢病毒载体,稳定转染A2B5+/CD133-胶质瘤干细胞株;将转染成功后的SHG-139s行二次球体形成实验观察转染后的干细胞成球率,免疫荧光及q RT-PCR检测干细胞标志物A2B5、CD133、Nestin、PLAGL2、ALDH1、SOX2的表达变化,探讨mi R-218-5p对SHG-139s人脑胶质瘤干细胞干性维持的影响。transwell实验及检测基质金属蛋白酶9(MMP9)的表达变化,探讨mi R-218-5p对SHG-139s人脑胶质瘤干细胞侵袭性的影响;结果q RT-PCR结果显示:mi R-218-5p在人脑胶质瘤组织中的表达显著低于非瘤脑组织;高级别胶质瘤组织中表达显著低于低级别胶质瘤组织;在人胶质瘤细胞株中的表达要显著低于正常人脑星形细胞株(NHA);mi R-218-5p在SHG-139s(A2B5+/CD133-)中的表达要低于SU2(CD133+)和U87s(CD133+)。干细胞标志物免疫荧光及q RT-PCR结果显示上调mi R-218-5p能降低SHG-139s干细胞标志物A2B5、SOX2、Nestin、ALDH1和PLAGL2的表达,免疫荧光结果显示mi R-218-5p表达的变化对CD133的表达没有明显影响,CD133在各对照组中均无表达。Transwell实验及基质金属蛋白酶9(MMP9)的表达变化显示mi R-218-5p能显著抑制SHG-139s胶质瘤干细胞的侵袭性。结论(1)mi R-218-5p在人脑胶质瘤组织和细胞中低表达;(2)mi R-218-5p在SHG-139s胶质瘤干细胞中显著低表达;(3)mi R-218-5p可能作为抑癌基因在胶质瘤中发挥作用,高表达的mi R-218-5p可抑制SHG-139s的干性维持及抑制其侵袭能力。