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心理应激时机体激活下丘脑-垂体-肾上腺(HPA)轴,从不同水平对雌性生殖系统产生多层次的抑制作用。HPA轴的主要中枢调节因子是CRH和精氨酸加压素(AVP),两者协同作用于垂体前叶促进ACTH和其他阿黑皮素原(POMC)衍生肽(如β-内啡肽)分泌,随后ACTH作用于肾上腺皮质促进肾上腺合成并释放糖皮质激素(GCs)。CRH和其诱导产生的β-内啡肽抑制促性腺激素释放激素(GnRH)分泌,肾上腺皮质分泌的GCs则抑制促黄体激素(LH)和卵巢中雌二醇、孕酮的产生,使靶组织或器官对雌二醇产生抗性。因此,应激过程中产生的CRH和GCs对雌性生殖系统的不利影响是非常明显的。本实验室前期研究认为,小鼠合子形成初期束缚应激48 h,可使胚胎发育能力明显降低,进而导致妊娠率降低,然而有关其作用机理并不清楚。因此,本实验选取CRH和GCs,通过体外直接添加或与小鼠输卵管上皮细胞(OECs)共培养或制取条件化培养液(CM)培养小鼠原核胚,探索CRH和GCs对着床前胚胎发育的影响,并对其作用机制进行深入研究。结果表明:(1)培养液中直接添加CRH不会损伤着床前胚胎发育(P>0.05),但与OECs共培养时添加CRH能明显降低原核胚发育至囊胚的比例(P<0.05)。利用WB检测发现小鼠OECs表达CRHR蛋白,且CRH促进其表达(P<0.05);利用激光共聚焦显微镜观察发现早期胚胎(囊胚阶段除外)都不表达CRHR蛋白,这说明CRH通过与OECs中CRHR结合,对小鼠早期胚胎体外发育产生不利作用。对OECs氧化应激指标检测发现,CRH造成细胞内GSH还原能力下降(P<0.05),过氧化物TOS水平以及OSI值升高(P<0.05),清除过氧化物的还原酶如SOD酶水平降低(P<0.05)、但过氧化氢酶水平升高(P<0.05),分泌的促胚胎发育生长因子水平降低(P<0.05),说明CRH诱导OECs发生氧化应激。进一步检测发现,OECs表达Fas水平升高(P<0.05),培养液中Fas L水平升高(P<0.05),说明OECs启动死亡受体途径,进而检测到细胞表达Caspase-3水平升高(P<0.05),细胞发生晚期凋亡的比例明显升高(P<0.05)。(2)培养液中直接添加GCs不会损伤着床前胚胎发育(P>0.05),但与OECs共培养时添加GCs能显著降低原核胚发育至囊胚的比例(P<0.05)。利用WB检测发现小鼠OECs表达GR蛋白,且GCs下调其表达(P<0.05);利用激光共聚焦显微镜观察发现不同发育阶段早期胚胎都表达GR蛋白。接着我们利用荧光定量RT-PCR检测早期胚胎,没检测到11-HSD1 mRNA表达,但GCs上调11-HSD2 mRNA表达水平(P<0.05)。因此,GCs可能通过11-HSD2解除对早期胚胎发育的直接阻碍作用,但可能通过与OECs中GR结合对胚胎发育产生不利作用。对OECs氧化应激指标检测发现,GCs造成细胞内GSH还原能力下降(P<0.05),过氧化物TOS水平以及OSI值升高(P<0.05),清除过氧化物的还原酶如SOD酶水平降低(P<0.05)、过氧化氢酶等水平升高(P<0.05),分泌的促胚胎发育生长因子水平降低(P<0.05),说明GCs诱导OECs发生氧化应激。进一步检测发现,OECs表达Fas水平升高(P<0.05),培养液中FasL水平升高(P<0.05),说明OECs启动死亡受体途径,进而检测到细胞表达Caspase-3水平升高(P<0.05),细胞发生晚期凋亡的比例明显升高(P<0.05)。总之,CRH或GCs通过与OECs中各自的受体结合,导致OECs发生氧化应激,并诱导OECs的凋亡。OECs凋亡进而引起囊胚的GSH还原能力下降(P<0.05),Fas和Caspase-3水平升高(P<0.05),说明对着床前胚胎也造成了氧化应激并发生凋亡,导致原核胚发育至4-细胞和囊胚的比例明显下降以及囊胚细胞数降低。