过渡金属纳米酶比色免疫体系的构建及其用于癌胚抗原检测研究

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癌胚抗原(CEA)作为一种常见的肿瘤标志物,在许多癌症中均有表达,包括胃癌,乳腺癌,卵巢癌,肺癌和结直肠癌等。因此,检测CEA浓度就变得尤为重要。现如今,基于纳米酶比色免疫检测方法因其成本低、易操作和可视化等优点受到了广泛的关注。本文主要通过溶剂热法和即时合成法制备了具有类过氧化物酶活性的三种过渡金属纳米材料:Fe3S4、FeS2@NiS、CuCo PBA,并构建了比色免疫检测CEA体系。主要研究工作如下:(1)利用氯化铁和硫脲作为原料一步溶剂热法合成Fe3S4纳米材料。其形貌为均匀的片状纳米材料,且具有类过氧化物酶活性。在H2O2存在下,Fe3S4纳米材料可以催化3,3’,5,5’-四甲基联苯胺(TMB)显色变蓝。基于此原理,构建了夹心型比色免疫检测CEA浓度。研究表明,在0.05-50 ng/mL范围内,CEA浓度与溶液吸光度大小呈线性关系,检测限为82 pg/mL。(2)以硝酸铁、硝酸镍和硫代乙酰胺为原料,采用苯甲醇溶剂热法合成过渡金属FeS2@NiS复合纳米材料。通过碳二亚胺法将抗体与复合纳米材料偶联,构建夹心型比色免疫检测CEA的方法。相比于Fe3S4纳米材料,合成FeS2@NiS复合纳米材料具有更优的类过氧化物酶活性。研究表明,在探究的最佳条件下,该比色免疫体系检测CEA在0.005-40 ng/mL范围内呈线性,检测限为12 pg/mL。该体系具有较宽的检测范围和更低的检测限。(3)为了减少实验操作和环境对纳米材料合成的影响,我们提出一种即时合成纳米酶的方法。当钴氰化钾溶液与乙酸铜溶液混合,可以即时合成具有类过氧化物酶活性的过渡金属纳米材料铜钴普鲁士蓝类似物(CuCo PBA)。因此,利用已标记CEA抗体的葡萄糖氧化酶(GOD-Ab2)测定被CEA抗体包被的微孔板上的CEA浓度。通过葡萄糖氧化酶(GOD)形成夹层免疫复合物后,GOD催化葡萄糖生成的H2O2与CuCo PBA纳米材料和TMB混合溶液反应变蓝,从而构建高灵敏比色免疫定量检测CEA的方法。研究表明,该体系检测CEA在0.05-60 ng/mL范围内呈线性,检测限为22 pg/mL。
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