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微生物源胶原蛋白酶相比动物、植物源胶原蛋白酶,具有获得简便、培养时间短等诸多优点,在食品、医药、新能源等多种行业中有着广泛应用。因此,开发优质微生物源胶原蛋白酶生产菌、提高菌株的产酶量以及对所产胶原蛋白酶的性质进行研究,对推动胶原蛋白酶的应用以及酶制剂的发展具有重要意义。本研究的主要实验及成果如下:(1)采用鱼皮水解试验和酶活力比较试验,从8株已知产胶原蛋白酶的菌株中选择菌株AL-13为实验菌株;采用生理生化特性鉴定,结合16S r DNA基因序列分析,对菌株AL-13进行菌种鉴定,并构建系统发育树,结果表明菌株AL-13为侧孢短芽孢杆菌(Brevibacillus laterosporus)。(2)对菌株AL-13产胶原蛋白酶的条件进行优化,以胶原蛋白酶活性为指标,采用单因素实验优化培养时间、培养温度等产酶培养条件,采用单因素实验确定产酶培养基碳源、氮源等主要成分,用响应曲面法优化产酶培养基。通过产酶条件优化,发现菌株AL-13于25℃、初始p H 8.0、接种量6%、发酵培养48 h时得到最大酶活(154.89U/m L),此时的产酶培养基为葡萄糖8.14 g/L、牛肉膏11.63 g/L、氯化钙0.17 g/L、磷酸氢二钾2.08 g/L、氯化钠9.48 g/L。产酶条件优化后最高酶活较优化前(16.14 U/m L)提高了约9.6倍。(3)采用硫酸铵分级沉淀除去菌株AL-13发酵液中大多数杂蛋白,获得纯化后的胶原蛋白酶粗酶液,纯化后的胶原蛋白酶比活力由10.02 U/mg升高到22.11 U/mg,纯化倍数为2.21倍,回收率为80.04%。对胶原蛋白酶以酪蛋白为底物时的酶促反应温度、p H、反应动力学性质等酶学性质进行研究,结果表明酶促反应最适温度为50℃、最适反应p H值为7、最适金属离子为Mn2+,胶原蛋白酶水解底物酪蛋白生成酪氨酸的Km值为2.86 mmol/L,Vmax值为136.99 mmol/(L·min),且该胶原蛋白酶不耐高温和强酸强碱,在温度为20~30℃、p H为5.5~7.5的条件下保存,酶活性损失最少。(4)利用菌株AL-13生产的胶原蛋白酶对水解土霉素菌渣进行研究,以期能分解菌丝体细胞,降低菌渣处理的成本及难度,提高土霉素菌渣的利用率。结果表明菌渣在发酵液添加时间为48 h、水解时长为60 h、添加量为15%的条件下,水解率(44.03%)最高;对土霉素菌渣的蛋白质含量进行测定,以15 g初始菌渣为例,水解前,菌渣的总蛋白含量为7.86 g,水解后,菌渣的总蛋白含量为4.13 g。经过水解的菌渣的总蛋白含量比未经过水解的菌渣减少了45.12%,此结果与菌渣质量的减少量(水解率)相近。