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N-氨甲酰谷氨酸(N-Carbamylglutamate,NCG)作为精氨酸(Arginine,Arg)内源激活剂被广泛应用于动物生产。研究发现其可显著缩短动物初情期、提高动物繁殖性能,但对于其作用机理的研究不多。本试验以小鼠下丘脑永生GnRH神经元离体细胞系GT1-7细胞为模型,研究NCG、Arg及雌激素受体抑制剂对GnRH合成与释放及GnRH相关基因表达的影响。试验一:探讨不同浓度NCG及Arg处理GT1-7细胞不同时间对GT1-7细胞增殖、GnRH分泌及GnRH分泌相关基因(GnRH、Kiss-1、GPR54、ERα、c-fos、nNOS)表达的影响。体外培养GT1-7细胞,处理组在培养液中分别添加NCG(10μM、100μM、1mM)或Arg(2mM、4mM),对照组培养液中分别添加NCG溶剂1M NaOH溶液或细胞培养液DMEM,处理12、24h后,收集细胞培养上清并进行细胞计数。使用ELISA试剂盒测定细胞培养上清GnRH浓度,并对GnRH分泌相关基因表达进行测定。结果表明,与对照组相比,各水平NCG及Arg处理对细胞增殖无影响(P>0.05);NCG(10μM、100μM、1mM)处理12h和高浓度Arg(40mM)处理24h均能抑制GT1-7细胞Gn RH分泌(P<0.05)。NCG(1m M)处理显著抑制GnRH、Kiss-1、GPR54、nNOS mRNA表达(P<0.05),Arg(4m M)处理显著抑制GnRH、Kiss-1、GPR54、nNOS以及ERαmRNA表达(P<0.05),可见NCG及Arg可能是通过下调Kiss-1、GPR54及nNOS基因表达抑制GnRH分泌。试验二:研究雌激素及雌激素受体抑制剂调控GT1-7细胞GnRH分泌的可能通路。以100pM雌激素及不同浓度雌激素受体抑制剂ICI182780(10pM、100pM、1nM)处理GT1-7细胞12h,分别研究其对GnRH分泌及相关基因表达的影响。结果显示,100pM雌激素显著促进GnRH分泌(P<0.05),雌激素受体抑制剂能够抑制雌激素对GnRH的促进作用,1nM雌激素受体抑制剂显著抑制GnRH分泌(P<0.05);雌激素受体抑制剂(1nM)显著抑制GnRH、ERα、Kiss-1以及nNOS mRNA表达(P<0.05)。表明雌激素受体抑制剂是通过下调ERα、Kiss-1以及nNOS mRNA表达抑制GnRH分泌的。综上所述,NCG、Arg和雌激素受体抑制剂ICI182780均能抑制GnRH分泌,这种作用是通过下调ERα、Kiss-1以及nNOS mRNA实现的,提示除Kiss-1外,nNOS可能是GnRH合成分泌的信号通路上的调控因子。