论文部分内容阅读
目的:探究S100A6蛋白在无功能性垂体腺瘤(NFPAs)组织的表达及亚细胞定位;结合患者临床资料,分析其表达与临床特征的相关性;探究S100A6蛋白在NFPAs患者血清中表达情况及临床意义;以鼠来源垂体腺瘤细胞系(TtT/GF)为研究对象,从生物细胞功能层面进一步探究S100A6对垂体腺瘤细胞的增殖、迁移、侵袭发挥的作用。本研究拟通过以上实验,初步明确S100A6蛋白在NFPAs中表达的临床意义,明确S100A6对垂体腺瘤细胞的生物学功能,以期发现新的NFPAs侵袭标志物或潜在的分子治疗靶点。方法:通过免疫组化检测NFPAs组织样本的S100A6蛋白的表达及分布情况;基于对应NFPAs患者的临床资料,用统计软件分析S100A6表达与患者临床特征之间的相关性。ELISA检测S100A6蛋白在NFPAs患者血清中表达情况及临床意义;标准的细胞培养方法培养垂体腺瘤细胞系TtT/GF,再通过siRNA转染方法下调S100A6的表达;Western Blot检测siRNA转染后TtT/GF细胞的S100A6、β-catenin的表达;Edu标记法、集落形成法(colony formation)检测转染后细胞增殖情况,用Transwell小室检测垂体腺瘤细胞迁移、侵袭能力的改变。结果:1.免疫组化显示,正常垂体的S100A6表达较弱,主要在细胞核表达;NFPAs组织中S100A6在细胞核、细胞质,细胞间隙中均有表达,主要以细胞质细胞外液表达为主。共识别出31例样本为S100A6高表达,39例S100A6样本低表达。统计分析显示,S100A6表达与NFPAs患者年龄、性别、肿瘤大小、临床症状均无显著性相关性,而NFPAs的侵袭性与S100A6高表达显著相关。2.ELISA检测结果经统计学分析表明S100A6在NFPAs组和健康组表达并没有显著性差异;而侵袭组血清S100A6浓度明显高于非侵袭组。3.Western Blot结果表明:相比于正常垂体,S100A6在NFPAs中表达较高。SiRNA-1实验组和SiRNA-NC对照组、Blank组相比,S100A6、β-catenin的蛋白表达均明显减少。4.Edu实验结果显示,SiRNA1实验组和NC-SiRNA对照组、Blank组相比,EDU标记的细胞明显减少。5.按要求培养两周后,集落形成实验结果显示,SiRNA1实验组和NC-SiRNA对照组、Blank组相比,细胞集落形成数量明显较少。6.Transwell迁移检测显示,SiRNA-1下调S100A6表达后,细胞纵向迁移到Transwell小室及穿过基质胶的细胞数明显较对照组减少。结论:1.与正常垂体相比,S100A6蛋白在NFPAs中过表达。S100A6蛋白表达定位在细胞核,细胞质和细胞外液,主要分布在细胞质或细胞外液中。NFPAs的侵袭性与S100A6的高表达密切相关。2.NFPAs患者血清中S100A6蛋白的表达与健康人血清无明显差异;相比于非侵袭性NFPAs,血清中S100A6蛋白的表达在侵袭性的NFPAs中明显更高。3.SiRNA-1介导的S100A6下调抑制了垂体腺瘤细胞的侵袭,增殖和迁移。siRNA介导的S100A6的下调诱导了β-catenin蛋白的表达减少。4.以上研究综合表明,S100A6的过表达可能在NFPAs的发展中起重要作用。S100A6的下调可能成为将来的潜在治疗靶标。S100A6蛋白与NFPAs的侵袭性显着相关,这可能是将来预测NFPAs侵袭性的有效血清标志物。