【摘 要】
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目的:胶质瘤现在被认为是一种遗传和表观遗传疾病,预后较差。MicroRNA(miRNA)的遗传变异被认为是胶质瘤发生的重要潜在危险因素。方法:1、使用实时荧光定量PCR实验,检测在胶质母细胞瘤临床组织样本和非肿瘤脑脑组织中microRNA-586(miR-586)的表达水平,以及检测miR-586在胶质瘤细胞株和人正常星形胶质细胞中的表达水平;2、使用CCK-8、平板克隆、流式细胞术和EdU实验,
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目的:胶质瘤现在被认为是一种遗传和表观遗传疾病,预后较差。MicroRNA(miRNA)的遗传变异被认为是胶质瘤发生的重要潜在危险因素。方法:1、使用实时荧光定量PCR实验,检测在胶质母细胞瘤临床组织样本和非肿瘤脑脑组织中microRNA-586(miR-586)的表达水平,以及检测miR-586在胶质瘤细胞株和人正常星形胶质细胞中的表达水平;2、使用CCK-8、平板克隆、流式细胞术和EdU实验,检测抑制miRNA-586后对U87细胞的生物学影响;3、通过miRNA靶基因在线预测网站预测miR-586的下游靶基因,通过双荧光素酶报告基因实验验证miR-586在下游靶基因3’-UTR的结合位点,以确认SFRP1是否是miR-586的直接靶标,Western blotting实验检测抑制miR-586后对下游靶基因SFRP1表达的影响;4、在下调miR-586的U87细胞株中共转染si-SFRP1,检测抑制SFRP1能否减弱下调miR-586对U87细胞的生物学影响,并使用CCK-8、流式细胞术、EdU实验及Western blotting实验进行分析;5、下调miR-586的U87细胞种植入裸鼠侧脑室后,通过Kaplan-meier生存分析、苏木素-伊红染色和免疫组织化学法分析抑制miR-586表达在体内对胶质瘤的影响。结果:1、MiR-586在胶质瘤组织和细胞中高表达,在U87细胞中显著高表达;2、抑制miR-586的表达能够显著抑制胶质瘤细胞增殖,并诱导胶质瘤细胞阻滞在G0/G1期;3、SFRP1是miR-586的下游靶基因,抑制miR-586的表达能够上调SFRP1表达;4、抑制SFRP1能减弱下调miR-586对U87细胞增殖和周期的影响;5、MiR-586的下调能够抑制胶质瘤生长;结论:下调miR-586能够上调SFRP1的表达来抑制胶质瘤细胞增殖,并诱导其细胞周期阻滞。
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