犬副流感病毒(Canine parainfluenza virus,CPIV)是引起犬窝咳的主要原因,在1967年从患呼吸道疾病的犬中首次被分离到,病犬的主要临床表现为咳嗽、流鼻涕等呼吸系统疾病症状。目前犬副流感病毒呈世界分布,对养犬业带来了巨大的经济损失,因此分离当下犬副流感病毒的流行株有利于了解病毒的流行情况,对于该病的防控也有很大的帮助。本研究工作主要分三部分进行:1、本试验建立了一种快速检测犬副流感病毒、犬瘟热病毒、犬细小病毒和犬腺病毒Ⅱ型的多重PCR方法。对其特异性和敏感性进行检测,结果表明良好。对采集的30份犬病料样品进行检测,CPIV阳性率0%(0/30)、CDV阳性率63.33%(19/30)、CPV阳性率33.33%(10/30)、CAV-2阳性率6.66%(2/30),证明建立的PCR方法可以用于临床诊断。2、本试验采集了咳嗽、流鼻涕等呼吸性系统疾病症状的病犬肺脏组织,用建立的多重PCR方法检测,其中单纯感染CPIV的肺脏组织制备成样品,接种非洲绿猴肾细胞(Vero)上进行分离培养。运用RT-PCR方法、病毒的电镜观察和血凝试验进行病毒的鉴定。结果RT-PCR试验显示有534bp特异性目的片段;病毒的电镜观察其超微结构呈圆形、直径在80-200nm之间、有囊膜等,与金昌德报道的一致;病毒能够凝集1%猪和鸡红细胞,与副流感病毒特性一致;克隆CPIV NP基因的ORF序列,并与GenBank上的副流感病毒进行同源性比较,高达97%以上,确定所分离的病毒为犬副流感病毒,并命名为CPIV-BJ01。3、本试验对CPIV-BJ01第八代和第九代进行了一步生长曲线的测定,结果显示在12-48h病毒迅速增殖,细胞培养液中病毒滴度急剧上升,60h之后趋于稳定。对病毒进行了热敏性试验、紫外照射试验和全长序列分析。结果显示病毒对热敏感、长时间的紫外照射会杀死病毒、全长序列分析其与PIV5 1168-1(登录号:KC237064.1)和PIV5 ZJQ-221(登录号:KX100034.1)同源性高达99%,且在同一个分支,亲缘关系较近。