柑橘黄龙病（Citrus Huanglongbing,HLB）是一种由韧皮部限制性革兰氏阴性菌引起的世界范围内柑橘生产的毁灭性病害,目前没有可以根治的方法,主要通过挖除病树、培育无毒苗木、防治柑橘木虱三步法进行防治,因此快速检测田间柑橘树染病情况对柑橘黄龙病的防治具有重要意义。分子生物学检测作为柑橘黄龙病的主要诊断手段,存在步骤较为繁琐、耗时较长等缺点,不易于田间广泛使用,而试纸条生物传感器具有简便、快速、成本低且不需要专业操作人员等优点,目前在病菌检测、农残检测以及健康监测等领域得到广泛的应用,为柑橘黄龙病的田间检测提供了广阔的应用前景。本文设计并构建了两种试纸条生物传感器,用于柑橘黄龙病的高效、灵敏和快速检测。主要研究内容及成果如下:1.胶体金免疫层析试纸条传感器构建及其用于柑橘黄龙病外膜蛋白可视化检测针对柑橘黄龙病菌含量低,传统的检测方法繁琐、耗时长这一难点,设计并构建了胶体金试纸条传感器,用于柑橘黄龙病菌外膜蛋白的检测。通过静电吸附,制备J8b单克隆抗体修饰的金纳米粒子并将其作为信号标签,当存在目标物黄龙病菌膜蛋白（Outer membrane protein）时,其与信号标签上的J8b单抗结合,形成抗原–抗体复合物;同时检测线上包被的多抗DF1将该抗原–抗体复合物捕获,显示出红色条带。通过观察检测线上红色条带的有无定性分析检测样品中是否含有Omp膜蛋白,进一步,通过评价条带颜色强度与Omp膜蛋白浓度之间的关系来定量分析Omp膜蛋白的浓度,从而达到可视化检测Omp膜蛋白的目的。实验结果表明,在探针加入量为4μL,检测线抗体包被浓度为3.0 mg/m L,缓冲溶液为PBS（p H=8.00）条件下检测柑橘黄龙病菌外膜蛋白Omp具有良好的线性关系,在20 ng/m L–1000ng/m L范围内,Omp膜蛋白检测限为18.94 ng/m L,加标回收率范围为102.9%–111.6%。2.时间分辨荧光微球试纸条传感器构建及其用于柑橘黄龙病菌膜蛋白的定量检测为了提高试纸条传感器在柑橘黄龙病早期诊断中的稳定性以及检测灵敏度,将时间分辨荧光微球与试纸条结合,设计并构建了一种新型荧光试纸条传感器用于柑橘黄龙病菌外膜蛋白的定量检测。以J8b单抗修饰的荧光微球作为信号标签,当目标物存在时,其首先与信号标签结合,同时被检测线上的多抗捕获从而在检测线上出现荧光条带;在紫外灯照射下观察荧光条带强度变化,可以定性判断样品是否含有Omp膜蛋白;通过监测检测线条带荧光强度的变化,可以实现对Omp膜蛋白的精确定量。结果表明在探针加入量为5μL,反应时间为15 min,包被浓度为1.3mg/m L,缓冲溶液为TBS（p H=8.00）条件下检测柑橘黄龙病菌外膜蛋白Omp具有良好的线性关系,在10 ng/m L–500 ng/m L范围内,Omp膜蛋白检测限为6.88 ng/m L,加标回收率范围为94.82%–102.76%。