柴胡是我国的传统中药和常用中药,主要包括伞形科多年生草本植物柴胡(北柴胡,Bupleurum chinensis DC.)和狭叶柴胡(南柴胡,Bupleurum scorzonerifolium Willd),具有抗炎、治疗肾病和自身免疫病的作用。小叶黑柴胡分布于我国的西北地区。在过去的研究中,我们从小叶黑柴胡根部提取出的柴胡多糖(Bupleurum polysaccharides,BPs),对急性肺损伤(acute lung injury,ALI)和系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus,SLE)具有良好的防治效果,并在离体研究中显示出显著的抗补体活性,但药物对单核吞噬细胞系统的作用未明。鉴于巨噬细胞在非特异性免疫系统中的重要性以及补体系统与巨噬细胞的紧密联系,我们选取小鼠腹腔巨噬细胞作为研究对象,研究柴胡多糖对巨噬细胞功能的影响,包括对其吞噬和趋化功能的影响；并在进一步研究中利用荧光技术观察柴胡多糖对巨噬细胞内钙离子浓度的影响,更好地了解柴胡多糖可能的作用机制。第一部分柴胡多糖对巨噬细胞吞噬功能的影响目的：研究柴胡多糖对巨噬细胞吞噬功能的影响。方法：分离小鼠腹腔巨噬细胞。分为两大组,分别为空白对照和补体激活产物处理组。每组中分别给以溶剂和5个剂量的柴胡多糖(400、200、100、10、1μg/mL)。应用荧光显微镜观察各组巨噬细胞吞噬FITC标记的大肠杆菌的情况,计数吞噬百分率和吞噬指数,并测定吞噬上清中MDA和SOD含量。结果：补体激活产物可使腹腔巨噬细胞吞噬百分率和吞噬指数显著高于空白对照组(P<0.001)；单用柴胡多糖(400、200、100、10、1μg/mL)能显著促进腹腔巨噬细胞的吞噬功能(P<0.001)；但显著抑制补体激活产物诱导的巨噬细胞的吞噬功能增强(P<0.001)。与空白对照组相比,补体激活产物能显著升高MDA含量,降低SOD含量(P<0.01)；而柴胡多糖对巨噬细胞吞噬液上清的MDA和SOD均无明显影响(P>0.05)。结论：柴胡多糖能促进巨噬细胞的吞噬功能,但对补体激活产物诱导的巨噬细胞吞噬功能增强有抑制作用,在此过程中不影响MDA、SOD含量。第二部分柴胡多糖对巨噬细胞趋化功能的影响目的研究柴胡多糖对小鼠腹腔巨噬细胞趋化功能的影响。方法分离小鼠腹腔巨噬细胞,进行下列实验。1)柴胡多糖的作用：a共培养部分：分为三大组,分别为空白对照、MCP-1处理组和补体激活产物处理组；每组中分别给以溶剂和5个剂量的柴胡多糖(BPs,终浓度400、200、100、10、1μg/mL)与上述巨噬细胞趋化因子共培育；应用transwell 24孔趋化板检测腹腔巨噬细胞的趋化功能和BPs对不同条件下细胞趋化作用的影响；b预处理部分：分组情况与a类似,但先经各趋化因子预处理后再加BPs,检测此时BPs对细胞趋化作用的影响；2)草乌甲素的作用：分离小鼠腹腔巨噬细胞。分为三大组,分别为空白对照、MCP-1处理组和补体激活产物处理组。每组中分别给以溶剂和5个剂量的草乌甲素(bulleyaconitin A,BLA,终浓度80、40、20、10、5ng/mL)。应用transwell 24孔趋化板检测腹腔巨噬细胞的趋化功能和BLA对不同条件下细胞趋化作用的影响。结果MCP-1和补体激活产物可使腹腔巨噬细胞趋化指数显著高于空白对照组(P<0.001)；1)共培养部分与预处理部分结果的变化趋势类似：单用BPs(400、200、100、10、1μg/mL)对腹腔巨噬细胞的趋化功能有显著促进作用(P<0.001),但显著抑制MCP-1以及补体激活产物诱导的巨噬细胞的趋化指数升高(P<0.001),而且在对两者的抑制程度方面有显著性差异；2)单用BLA(80、40、20、10、5ng/mL)对腹腔巨噬细胞的趋化功能无显著性影响(P>0.05)；但显著抑制MCP-1以及补体激活产物诱导的巨噬细胞的趋化指数升高(P<0.001)。结论1)柴胡多糖能促进腹腔巨噬细胞的趋化功能,但能抑制趋化因子对巨噬细胞的趋化作用；2)BLA能抑制趋化因子对腹腔巨噬细胞的趋化作用,但对腹腔巨噬细胞无直接作用。第三部分柴胡多糖对巨噬细胞内钙离子浓度的影响目的：研究柴胡多糖对巨噬细胞内钙离子浓度的影响。方法：分离小鼠腹腔巨噬细胞。1)加入不同浓度(400、200、100μg/mL)的柴胡多糖,观察在无刺激条件下,柴胡多糖对巨噬细胞内钙离子浓度的影响。2)加入LPS预处理后,再加入柴胡多糖,观察柴胡多糖对LPS引起的巨噬细胞内钙离子浓度升高的影响。结果：1)在无刺激条件下,各浓度柴胡多糖能引起巨噬细胞内钙离子浓度的振荡；2)LPS预处理可显著升高巨噬细胞内钙离子浓度,再用柴胡多糖处理,内钙离子浓度有明显的下降趋势。结论：柴胡多糖能引起巨噬细胞内钙离子浓度振荡,但对LPS诱导的巨噬细胞内钙离子浓度升高有抑制作用。