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随着人们对疾病本质的进一步认识,中国医学与西方医学之间存在着诸多契合点,诸如中医络病学说被赋予了现代医学的含义,成为中西医结合的成功典范。而毒损脑络病机的提出及其现代生物学基础的研究,为许多中枢神经系统疾病如缺血性脑卒中、阿尔茨海默病、帕金森病等提供了行之有效的治疗方案。大量研究表明,传统中医络病学说与微循环之间的关系极为密切。而神经血管单元概念的提出为毒损脑络学说提供了现代医学依据。肿瘤坏死因子超家族(tumor necrosis factor superfamily TNFSF)由19种配体及28种受体构成。由配体介导的TNFSF受体的活化在多种中枢神经系统(central nervous system CNS)疾病如:多发性硬化、脑缺血疾病等的发病过程中发挥重要作用。肿瘤坏死因子样凋亡弱诱导剂(tumor necrosis factor-like weak inducer of apoptosis TWEAK)是TNFSF中的一员,它能与细胞表面受体成纤维细胞生长因子诱导型14(fibroblast growth factor-inducible14Fn14)相结合,而发挥生物学作用。大量研究结果表明TWEAK与Fn14之间的相互作用可激活内皮细胞、星型胶质细胞、神经元及小胶质细胞上的核因子kB (nuclear factor kappa B NF-kB)途径进而上调NF-kB调节的相关基因的表达,在细胞死亡、神经血管单元通透性调节及中枢神经炎症反应等方面发挥生理或病理作用。因此,研究TWEAK-Fn14-NF-KB通路在缺血性脑病中的变化规律及通络救脑注射液的干预作用不仅可以进一步丰富神经血管单元的研究,而且深化了络病学说的丰富科学内涵及独特的临床价值。目的:观察TWEAK-Fn14-NF-KB通路在MCAO大鼠脑缺血模型脑组织中的时序性表达特征,探索其与缺血性脑损伤病理过程的关系;并采用通络方药通络救脑注射液(TLJN)干预,探索TLJN抗缺血性神经损伤的途径,进一步研究该药的抗神经损伤机制是否与TWEAK-Fnl4-NF-KB通路有关,进而为中医毒损脑络学说提供现代生物学依据。方法:1.首先制造MCAO大鼠脑缺血模型,对其进行神经功能评分,分别采用HE染色及TTC法对MCAO大鼠脑组织进行形态学及脑梗死体积分析,探讨通络救脑注射液干预下各时间点神经功能及脑组织形态学、脑梗死体积的改善情况。2.采用免疫组织化学及免疫印迹Western blot的方法观察MCAO大鼠脑缺血模型脑组织中TWEAK、 Fn14及NF-kB在不同时间点的时序性变化特征,进而探讨TWEAK-Fn14-NF-KB通路在脑缺血病理过程中是否发生变化及通络救脑注射液是否通过该通路发挥抗神经损伤作用。结果:1.通过对MCAO大鼠脑缺血模型神经功能评分、脑组织形态学及脑梗死体积的分析,我们发现在脑缺血病理过程中神经功能缺失加重;脑组织出现间质性及细胞源性水肿、间质疏松化,神经元数目减少、出现细胞核碎裂溶解或嗜酸性变,神经胶质细胞及内皮细胞水肿,大量炎症细胞浸润合并继发性脑组织出血。通络救脑注射液能够改善神经功能,减轻脑组织缺血性病理学改变,显著缩小脑组织梗死体积。2.脑缺血病理过程中,脑组织中TWEAK, Fn14及NF-kB表达呈现显著性增加,TWEAK-Fn14-NF-KB通路参与了脑缺血的病理过程,通络方药-通脑救脑注射液可通过抑制TWEAK-Fn14-NF-KB通路发挥神经保护作用。结论:1.通络救脑注射液能够较为显著的改善神经功能缺失、减轻脑缺血病理过程中形态学改变、缩小脑梗死体积,说明通络救脑注射液具有较为显著的抗神经损伤作用。2.在脑缺血病理过程中,脑组织中TWEAK, Fn14及NF-kB呈现时序性增高且变化趋势较为一致,说明TWEAK-Fn14-NF-KB通路在脑缺血病理过程中发挥关键作用,并且通络救脑注射液抗脑缺血损伤的作用机制与下调缺血脑组织中的TWEAK-Fn14-NF-KB通路密切相关。