Toll样受体(Toll-like receptors,TLRs)是固有免疫系统中一类重要的跨膜信号传递蛋白,通过识别病原微生物保守的分子相关模式启动对病原体的识别,从而实现早期抗感染作用,并为获得性免疫提供相关活化分子。Toll样受体15(Toll-like receptors 15,TLR15)作为禽类所特有的模式识别受体,其在禽类免疫系统的作用分析有助于了解该分子的抗感染作用机制,并为免疫制剂的开发提供基础依据。本研究以东北白鹅为试验对象,对TLR15在相关炎症反应中的作用进行了系列分析。本研究首先采用反转录PCR技术克隆东北白鹅TLR15基因,并通过生物信息学软件分析该基因的结构特征、分类地位和进化关系;同时构建东北白鹅TLR15部分序列原核表达载体,诱导重组蛋白表达,制备兔抗鹅TLR15序列多克隆抗体;其次在细菌脂多糖(LPS)诱导下建立雏鹅炎症反应模型,应用荧光定量PCR技术,分析东北白鹅TLR15基因以及相关免疫因子在不同组织的转录水平;再应用免疫组织化学技术,对TLR15在不同组织的表达水平进行检测。结果表明:1、东北白鹅TLR15基因片段长度2 598 bp,编码865氨基酸残基,1-24位氨基酸形成信号肽区域,650~672位氨基酸形成跨膜信号;具有磷酸化位点78个,其中13个位于LRRs区,9个位于胞内区;糖基化位点16个。胞外区序列长度为1 845 bp,含有5个变异位点(第357、451、720、1 120和1 401位),编码615氨基酸残基,胞外区形成“马蹄形”结构,包含6个LRRs的结构域。经核苷酸序列比较发现,东北白鹅与鸿雁的同源性最高,为99.85%,与爬行动物同源性在40%~70%。表明鹅TLR15在进化关系上,与鸿雁最近,与家禽和鸟类较近,与爬行类较远,在哺乳动物中已经退化。2、诱导的重组蛋白分子量为43 kD,免疫后获得的多克隆抗体效价为1:20 000;在LPS诱导下,东北白鹅TLR15及其相关免疫因子(IFN-α、IFN-γ、IL-1β和IL-6)转录水平均高于对照组,其中TLR15、IFN-α和IFN-γ在法氏囊组织转录水平最高(P<0.01),在心脏和肺脏等组织转录水平较低;IL-6在胸腺中转录水平最高,在肝脏和脾脏中转录水平较低。表明在炎症反应中TLR15及其免疫因子在不同组织的转录水平存在一定的差异。同一组织中,不同因子的转录水平也不相同,法氏囊中高表达IFN和TLR15,骨髓中高表达IL和TLR15。免疫组织化学检测结果显示,TLR15在法氏囊、脾脏和肝脏中表达差异极显著(P<0.01),在肺组织和肾组织中表达显著(P<0.05);表明在LPS诱导下,东北白鹅TLR15基因转录水平和翻译水平基本一致。本研究对东北白鹅的TLR15进行了克隆、原核表达及抗体制备,对LPS诱导下TLR15的变化规律进行了分析。为东北白鹅TLR15的抗感染机制提供了理论依据,同时也为免疫增强剂的开发奠定了基础。