番茄（Lycopersicon esculentum Mill）具有很高的营养价值,越来越深受人们的喜爱,成为人们日常生活中不可或缺的水果蔬菜之一。番茄的种植面积不断扩大,病虫害的危害越来越严重,其中以烟粉虱为媒介传播番茄黄化曲叶病毒（Tomato yellow leaf curl virus,TYLCV）给植物是最为严重的病虫害,能引起植株严重矮化,新生叶片黄化卷曲,果实小而畸形等症,严重影响植株的生长,使其基本失去营养价值和商品价值。在生产中有些番茄品种性状和品质优于其他品种的番茄,但由于后期对TYLCV不抗,面临被淘汰的风险。所以运用现代生物技术培育抗TYLCV的新品种对优质品种的保持有重大影响。现目前有人工小RNA（Artificial micro RNA,amiRNA）干扰技术运用于抗病毒转基因策略,通过生物体内源micro RNA（mi RNA）的作用机制人为沉默病毒靶基因,能够稳定有效避免脱靶效应及减少重组病毒的产生,同时应用农业生产中有更少的生物安全问题。因此,本研究拟采用amiRNA和组织培养技术,先以靶标TYLCV CP设计amiRNA并构建表达载体,其次以不抗TYLCV番茄‘851’为研究材料建立离体再生体系,最后将amiRNA表达载体转化番茄建立遗传转化体系,经抗性鉴定获得抗病毒转基因番茄。取得以下研究结果:（1）构建了沉默TYLCV外壳蛋白（CP）基因的amiRNA表达载体。在WMD3网站设计针对特异性沉默TYLCV-CP基因的amiRNA序列,经重叠PCR扩增将拟南芥mi R319a的前体序列中mi R319a替换成amiRNA并且成功构建了amiRNA表达载体p CPBI121-ami R-TYLCV。（2）建立了番茄材料‘851’高效离体培养体系。通过组培快繁的方法对番茄离体再生的培养条件进行筛选,结果表明番茄种子浸泡3 h,先暗培养3 d后光培养能够获得最佳生长状态的无菌苗;以MS+2.0 mg/L 6-BA为基础培养基,子叶节、下胚轴和子叶为外植体筛选出诱导不定芽形成的最佳IAA浓度分别为0.2 mg/L、0.3 mg/L和0.5 mg/L以及最佳苗龄为10 d、14 d和8 d;最佳不定芽生根培养基为MS+0.5 mg/L IAA。（3）建立了amiRNA介导番茄抗TYLCV的遗传转化体系。设置不同浓度的卡那霉素进行番茄抗激素敏感试验,得出25 mg/L的卡那霉素最适合用于遗传转化中抗性植株的筛选。利用叶盘法和L9（3~4）的正交实验法转化番茄的下胚轴,筛选出预培养3 d,农杆菌OD600=0.6,侵染10 min,共培养2 d为最佳遗传体系。（4）转基因番茄植株的抗病性鉴定。对转化出的11个株系的转基因植株试管苗接种靶标病毒TYLCV,发现有5个株系的转基因植株攻毒后无感病症状,有6个株系表现出轻微感病症状,结果表明转基因番茄对靶标病毒TYLCV存在一定的抗性,从而验证了amiRNA技术和ami R-TYLCV介导的番茄遗传转化体系具有可行性和有效性。