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卵巢癌是妇科三大恶性肿瘤之一,死亡率居妇科恶性肿瘤之首,大部分的患者在诊断时肿瘤已经发生转移,严重威胁女性生命和健康。目前,手术是治疗卵巢上皮性癌的主要手段,绝大多数患者术后需要辅以铂类和紫杉醇为主的化疗,但晚期卵巢癌患者长期生存率仍不超过20%。因此,迫切需要寻找新的治疗方法。在实体肿瘤的微环境中,组织缺氧是最常见的现象,因为肿瘤生长需要巨大的能量和氧的消耗,缺氧可导致肿瘤细胞的增殖、凋亡和侵袭。在分子水平上,缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)是细胞适应缺氧的主要调节因子,HIF-1α的表达引起肿瘤细胞增殖和肿瘤内部缺氧,导致癌基因的活化和抑癌基因的失活,抑制HIF-1α可以显著抑制肿瘤的生长。组蛋白去乙酰化酶抑制剂(HDACIs)是一类正在研发的抗肿瘤药物,具有高效、低毒的特点,能够抑制肿瘤细胞增殖、诱导细胞周期阻滞、促进肿瘤细胞凋亡。最近的研究表明,HDACIs还可以抑制缺氧诱导因子的表达。HDACIs抑制缺氧诱导因子的功能和抑制缺氧诱导因子的表达的直接的分子靶点与生化机制仍然难以确定。本研究通过免疫组化的方法,检测组蛋白去乙酰化酶1 (HDAC1)在卵巢上皮性癌组织中的表达,并探讨其临床病理意义。成功构建和鉴定HDAC1的siRNA慢病毒干扰质粒,并用缺氧模拟剂去铁胺甲磺酸(Deferoxamine Mesylate, DFOM)诱导卵巢癌细胞系COC1建立了细胞缺氧模型,在此基础上,用构建的质粒转染缺氧的COC1细胞,通过MTT、流式细胞术realtime-PCR、免疫荧光和Western Blot等技术研究siRNA沉默HDAC1基因后对HIF-1α的表达的影响及可能的机制进行初步的探讨。实验研究如下：(1)组蛋白去乙酰化酶1在人上皮性卵巢癌组织中的表达及其临床病理意义选取吉林大学第二医院病理科2005年1月至2009年12月期间92例卵巢手术患者的卵巢组织蜡块标本,其中卵巢癌45例(浆液性16例,粘液性7例,子宫内膜样13例,透明细胞癌9例),交界性囊腺瘤15例(浆液性8例,粘液性7例),良性卵巢瘤23例(浆液性9例,粘液性12例),正常卵巢组织9例为因良性疾病而切除卵巢者。进行免疫组化研究,并收集45例上皮性卵巢癌患者的临床资料,进行临床病理分析。结果：HDAC1在正常卵巢组织中基本不表达,在卵巢良性肿瘤中开始出现弱阳性表达,在卵巢交界性肿瘤中呈阳性表达,在卵巢癌中呈阳性或强阳性表达。随着组织异型程度的增加,HDAC1的表达逐渐增强。提示HDAC1的表达增强是卵巢癌发生的早期事件,HDAC1的强阳性表达可能与卵巢癌的进展有关。HDAC1强阳性表达的肿瘤患者生存时间和生存率明显低于HDAC1阴性或弱阳性表达者,表明HDAC1强阳性表达与卵巢癌患者的不良预后相关,可作为判断预后的一个独立性指标。(2) HDAC1 siRNA干扰质粒的构建及鉴定根据NCBI数据库提供的人HDAC1基因的mRNA序列,参考siRNA的设计原则,设计3条RNA干扰靶序列。经BLAST Search检索确认与HDAC1以外的人类已知基因序列无同源性。设计siRNA正义链和反义链,以loop(9nt)相连,即为shRNA (short hairpin RNA),为71bp,并在5’端和3’端融合BamH I和Xho l酶切位点。将互补的序列退火、插入pRNAT-U6.2/Lenti载体,转化到E.coli感受态细胞中扩增,阳性克隆鉴定,质粒抽提及测序。结果：我们成功的构建了HDAC1的3个shRNA干扰慢病毒质粒,并进行测序鉴定,结果测序完全符合设计的序列。(3) HDAC1 siRNA对卵巢癌细胞缺氧的影响及机制卵巢癌COC1细胞处于对数生长期时,加入2.5μmol/L的Deferoxamine Mesylate (DFOM) 48小时,建立缺氧的细胞模型。实验分三组：第一组(对照组)：COC1；第二组(缺氧组)：COC1/H+空质粒载体；第三组(转染组)：COC1/H+HDAC1 siRNA组。用MTT、流式细胞术、realtime-PCR.免疫荧光、Western Blot等技术研究siRNA沉默HDAC1后对HIF-1α的表达的影响及可能的机制进行初步的探讨。结果：2.5μmol/L的Deferoxamine Mesylate (DFOM)作用卵巢癌COC1细胞48小时,可以诱导HIF-1α的表达,细胞增殖加快,同时HDAC1表达升高。用构建的质粒转染卵巢癌COC1细胞后,再用缺氧模拟剂DFOM诱导细胞缺氧,转染组与缺氧组相比,HIF-1α的表达明显减少,同时Bcl-2表达下调,Bax表达上调,Bcl-2/Bax比率下调。这些结果提示沉默HDAC1基因对HIF-1α的表达的抑制,可能与促进细胞凋亡相关。结论：(1) HDAC1在人卵巢癌组织中表达增高,HDAC1的强阳性表达与卵巢癌的进展、恶性程度和预后密切相关。(2)成功地构建了HDAC1-siRNA慢病毒干扰质粒,为进一步研究HDAC1基因沉默及抗卵巢癌的机制奠定基础。(3)用缺氧模拟剂DFOM诱导卵巢癌COC1细胞,成功建立了缺氧的细胞模型,在常氧下能激活HIF-1α的表达,和传统的缺氧孵箱相比,经济、快速、作用肯定,为我们研究HIF-1α的功能提供了一种方便的细胞缺氧模型。(4)缺氧的COC1细胞,在HIF-1α表达升高的同时,可观察到HDAC1的表达增强,表明HDAC1可能参与了细胞对缺氧的适应。(5)沉默HDAC1基因可诱导缺氧的卵巢癌COC1细胞的HIF-1α表达减少,与下调抗凋亡基因Bcl-2和上调促凋亡基因Bax有关,可能与促进卵巢癌细胞的凋亡相关。