美洲大蠊提取物、溶血磷脂酰胆碱衍生物活性及制剂研究

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目的:研究美洲大蠊提取物的制备过程,及其抗真菌活性和对NKT细胞的激活作用,并研究合成溶血磷脂酰胆碱衍生物对NKT细胞的免疫活性作用。同时以美洲大蠊为主药,制备了复方美洲大蠊片,并对其质量标准进行了初步研究。方法:分别采用不同的提取方法、提取溶剂对美洲大蠊进行提取。运用微生物测定方法研究美洲大蠊提取物的抗真菌活性。运用酶联免疫吸附法研究不同的美洲大蠊提取物对NKT细胞的激活作用。运用酶联免疫吸附法研究溶血磷脂酰胆碱(LPC)衍生物的NKT激活作用。以重量差异,脆碎度等为考察指标,采用单因素实验和正交试验,优选复方美洲大蠊片的成型工艺。按《中国药典》制剂通则项下相关规定进行外观、重量差异、崩解时限等的检查;建立丹参、山楂、三七和美洲大蠊薄层色谱鉴别方法;采用高效液相色谱法,测定丹参酮ⅡA、丹酚酸B的含量,并对方法学进行了考察。结果:通过实验得到五种不同的美洲大蠊提取物。通过抗真菌活性研究,发现氯仿-甲醇(1:1)提取物、正丁醇提取时的水层产物、正丁醇提取物与氟康唑联用对白色念珠菌耐药株有联合抗菌的效果。通过酶联免疫吸附实验,发现美洲大蠊石油醚提取物、氯仿-甲醇(1:1)提取物、正丁醇提取时水层产物在一定的浓度下具有激活NKT细胞的作用。溶血磷脂酰胆碱(LPC)衍生物对于NKT细胞具有激活作用。以美洲大蠊为主药制备了复方美洲大蠊片,制备工艺为:取美洲大蠊、丹参,加入10倍量70%乙醇,回流提取2次,每次1小时,滤过;滤液回收乙醇备用;滤渣与山楂混合,加入10倍量水提取2次,每次1.5小时,滤过。将乙醇回收后的滤液与水提液混合浓缩至相对密度为1.25(80℃)的清膏,与三七细粉、葛根细粉、4%的氧化镁(以美洲大蠊药材计)混匀,干燥粉碎成细粉,加3%的聚维酮K30制成颗粒,加入3%的滑石粉混匀,压片即得。质量标准研究,崩解时限、重量差异符合药典规定;薄层色谱鉴别符合规定;复方美洲大蠊片中每片含丹参酮ⅡA不得低于0.12mg,丹酚酸B不得低于1.4mg。结论:美洲大蠊提取物具有抗菌及免疫调节作用,部分提取物具有NKT细胞的激活作用,可以作为NKT细胞的天然产物类外源性抗原。溶血磷脂酰胆碱(LPC)衍生物也具有对NKT细胞的激活作用,可以作为NKT细胞的化学合成类外源性抗原。对这两类物质的NKT活性研究,对于NKT细胞外源性抗原的研究具有巨大的推动作用。复方美洲大蠊片制备工艺稳定可行,质量标准薄层鉴别及含量测定方法重现性好,可用于复方美洲大蠊片质量控制。
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