旋毛虫早期抗原基因诊断方法的建立

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旋毛虫病是全世界投入控制费用最高的人兽共患寄生虫病之一,给食品安全、人类健康和生猪业发展带来了巨大的威胁。法规的旋毛虫病检验方法为镜检法和集样消化法,而这两种方法漏检率高,操作过程繁琐并且存在各种制约因素。ELISA是目前最为敏感的检测方法,而目前所广泛选用的基于虫体所获得的抗原如ES抗原、CAg和可溶性抗原等存在组分复杂、不利于大规模生产、制备过程繁琐等弊端,此外,还存在严重的交叉反应和诊断盲区(感染后19天前无法检出)。相比之下,基因重组蛋白所具备的成分单一,特异性强,纯度高,易于体外批量生产等优点使其成为候选诊断抗原的最佳来源,近年来成为人们的研究热点。本实验室已分别从新生幼虫、成虫、肌幼虫cDNA文库中成功筛选出具有期特异性的高丰度高反应原性优势抗原基因。本实验在此基础上选取了:肠道第一期幼虫(inML)半胱氨酸蛋白酶抑制剂基因T625-55,成虫Ad3期丝氨酸蛋白酶家族基因L23,以及新生幼虫期(NBL)丝氨酸蛋白酶基因WN18,三种旋毛虫早期抗原基因作为诊断抗原基因,利用其原核表达后纯化的重组蛋白作为抗原,优化各种反应条件,检测感染不同天数的旋毛虫的猪阳性血清,分别建立了ELISA检测方法。并在三种早期重组抗原蛋白的最佳条件下,优化组合建立了猪旋毛虫病早期相关抗原的ELISA检测方法。实验结果表明混合早期重组抗原可以最早检出13天的血清,经初步检测,所建立的早期相关抗原的ELISA检测方法具有很好的特异性和敏感性。很好的解决了早期免疫诊断盲区(感染后19天前)的问题。
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