基于辣根过氧化物酶/金纳米颗粒标记的电化学免疫分析

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电化学免疫分析因具有选择性好、灵敏度高、检测下限低、成本低和仪器操作简便等优点,在生医分析等领域备受关注。本学位论文在简要综述电化学相关的免疫分析方法及信号输出与放大方式的基础上,以人免疫球蛋白G(h Ig G)为检测对象,以辣根过氧化物酶(HRP)/金纳米颗粒(AuNPs)作信号标记,基于电位法或伏安法(含恒电位安培法)研究了电化学免疫传感性能。主要研究内容如下。1.基于H2O2存在时HRP催化氧化2,2’-二氮-双(3-乙基苯并噻唑-6-磺酸)(ABTS)为2,2’-二氮-双(3-乙基苯并噻唑-6-磺酸)自由基阳离子(ABTS·+)的原理,采用电位法和紫外可见分光光度法(UV-vis)测定了HRP的活性。电位法和分光光度法测定酶活性的结果吻合良好。基于电还原2-吡啶甲酸修饰玻璃碳电极(2-Py CA/GCE),碳二亚胺(EDC)和N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)活化2-Py CA/GCE表面的羧基以共价固定一抗(Ab1),HRP标记二抗(HRP-Ab2),研究了h Ig G的电化学免疫传感。采用电化学法和石英晶体微天平(QCM)对相关材料和免疫电极进行了表征。在ABTS-H2O2体系中,电位法检测h Ig G的线性检测范围(LDR)为0.50 pg m L-1~500 ng m L-1,检测下限(LOD)为0.024 pg m L-1(S/N=3);安培法检测h Ig G的LDR为0.5 pg m L-1~500 ng m L-1,LOD为0.089 pg m L-1(S/N=3)。2.在上述2-Py CA/GCE上类似地固定Ab1,AuNPs标记二抗(AuNPs-Ab2),利用原位微升滴阳极溶出伏安法检测阴极富集后的Au的阳极溶出峰,研究了h Ig G的电化学免疫传感。采用电化学法、UV-vis、扫描电子显微镜(SEM)和X射线能量色散谱(EDS)对相关材料和电极进行了表征。优化条件下,h Ig G的LDR为5 pg m L-1~500 ng m L-1,LOD为3.7 pg m L-1(S/N=3)。3.在上述2-Py CA/GCE上类似地固定Ab1,AuNPs同时吸附HRP和抗体形成二抗复合物(HRP-AuNPs-Ab2),在对苯二酚(HQ)-H2O2体系中,采用电位法检测体系中的开路电位和安培法检测体系中对苯醌(BQ)的还原电流,实现了h Ig G的免疫分析。采用电化学法、UV-vis、QCM、SEM和EDS对相关材料和电极进行了表征。电位法检测h Ig G的LDR为0.5 pg m L-1~500 ng m L-1,LOD为0.032 pg m L-1(S/N=3)。安培法检测h Ig G的LDR为0.5 pg m L-1~500 ng m L-1,LOD为0.11 pg m L-1(S/N=3)。
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