虾青素对丙烯酰胺所致海马神经细胞损伤的保护作用研究

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作为一种潜力极大的类胡萝卜素,虾青素不仅可以清除自由基、降低脂质的过氧化程度,还可以抗癌、延缓衰老、提高免疫力。近些年来,有关虾青素抗氧化作用方面的研究正在不断深入。丙烯酰胺(Acrylamide,ACR)为常见的化工原料之一,并在工业及科研中得到了广泛的应用。ACR是一种蓄积性的神经毒物,有报道显示,其神经损伤机制可能是由于其对神经系统具有氧化损伤作用。因此,本课题主要从丙烯酰胺对SD新生大鼠海马神经细胞损伤方面,探讨了虾青素对海马神经细胞的保护作用。为了研究虾青素对丙烯酰胺所致海马神经细胞损伤的保护作用,本实验分别从虾青素对丙烯酰胺所致海马神经细胞的生存能力、抗氧化酶系统及线粒体损伤三个方面的保护作用展开了研究。实验先对SD新生大鼠海马神经细胞进行了原代分离与培养,并采用神经元特异烯醇化酶抗体(NSE)染色法对原代培养的海马神经细胞进行了鉴定。为了研究虾青素对海马神经细胞生存能力损伤的保护作用,本实验采用MTT比色法对细胞存活率进行了检测,采用倒置显微镜对海马神经细胞的形态进行了观察;采用比色法就海马神经细胞中的超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)及谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性进行测定,研究了虾青素对丙烯酰胺所致海马神经细胞抗氧化酶系统损伤的保护作用;并通过MTT法检测海马神经细胞线粒体活性,化学比色法测定海马神经细胞线粒体内丙二醛MDA、一氧化氮NO的含量,就虾青素对丙烯酰胺所致海马神经细胞线粒体损伤的保护作用进行了研究。NSE免疫组化鉴定结果显示,原代培养细胞胞体呈棕黄色阳性染色,表明所培养细胞为海马神经细胞;经丙烯酰胺损伤后,海马神经细胞的存活率明显下降(P<0.01),而虾青素高、中剂量组(1.0x10-5、1.0x10-6mol·L-1)可以显著提高海马神经细胞的存活率(P<0.01)。倒置显微镜下,丙烯酰胺组海马神经细胞无法贴壁生长,形态受到了严重的损伤,而虾青素高剂量组(1.0x10-5mol·L-1)海马神经细胞多数恢复贴壁生长,表明虾青素对丙烯酰胺所致海马神经细胞形态损伤具有修复作用;丙烯酰胺组海马神经细胞SOD活性、CAT活性及GSH-Px活力明显降低(P<0.01),而虾青素高、中剂量组(1.0x10-5、1.0x10-6mol·L-1)能够显著提高SOD活性、CAT活性及GSH-Px活力(P<0.01);丙烯酰胺组海马神经细胞线粒体活性明显降低(P<0.01),虾青素低剂量组(1.0x10-7mol·L-1)能够提高线粒体活性(P<0.05),而虾青素高、中剂量组(1.0×10-5、1.0x10-6mol·L-1)能够显著提高线粒体活性(P<0.01)。丙烯酰胺组海马神经细胞线粒体MDA. NO含量明显升高(P<0.01),虾青素高、中剂量组1.0x10-5、1.0×10-6mol·L-1) MDA、NO含量明显降低(P<0.01)。由此可知,虾青素可以抑制丙烯酰胺作用下海马神经细胞生存能力的下降;虾青素对丙烯酰胺引起的海马神经细胞抗氧化酶系统的损伤具有一定的修复作用;虾青素对丙烯酰胺作用下海马神经细胞线粒体损伤具有保护作用。通过本文的研究得出如下方面的结论:虾青素对丙烯酰胺所致海马神经细胞损伤具有一定的保护作用,其机制同其抗氧化活性密切相关。
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