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二脂酰甘油酰基转移酶(diacylglycerol O-acyltransferase，DGAT)是催化甘油三酯合成的关键限速酶。以往有关DGAT2的研究主要集中在其对脂肪细胞聚酯和肥胖的关系，而对调控脂肪酸组成的相关研究报道极少。本实验室在前期研究发现，地方品种蓝塘猪与瘦肉型猪长白猪的肌肉脂肪酸组成有明显差异，而DGAT2的表达水平也存在明显的品种间差异。为了研究DGAT2是否具有调控细胞脂肪酸组成的作用，本试验克隆了猪DGAT2基因开放阅读框，并构建了猪DGAT2过表达细胞模型和干扰细胞模型，观察了过表达猪DGAT2对3T3-L1细胞甘油三酯含量及脂肪酸组成的影响。另外在培养液中添加棕榈酸、棕榈油酸、硬脂酸、油酸、亚油酸及花生酸，研究DGAT2对不同脂肪酸沉积的影响，并通过荧光定量PCR及western-blot检测脂肪酸相关基因的表达差异。在此基础上，在培养液中添加含13C标记的棕榈酸、硬脂酸和油酸，待细胞培养12d后，采用GC-IRMS检测细胞中各标记脂肪酸的δ值，以研究DGAT2对不同脂肪酸在细胞内的选择性沉积。研究结果表明： 1.过表达组细胞的DGAT2mRNA表达水平极显著高于对照组(提高了63倍)；甘油三酯含量是对照组的2.27倍；棕榈油酸和油酸的相对含量也显著高于对照组(P<0.05)，饱和脂肪酸的相对含量则显著低于对照组，而单不饱和脂肪酸相对含量则显著高于对照组(P<0.05)。干扰组细胞DGAT2 mRNA表达水平约为对照组细胞的49％。 2.DGAT2的表达调控对不同脂肪酸底物在细胞内短时间沉积(30min)有明显影响，其中干扰组细胞棕榈油酸、油酸和总单不饱和脂肪酸相对含量极显著高于对照组，而棕榈酸和总饱和脂肪酸极显著低于对照组(P<0.01)；过表达组细胞棕榈油酸的相对含量显著高于对照组(P<0.05)。另外，DGAT2的表达调控对不同脂肪酸底物在细胞内长时间沉积(8d)也有明显差异，其中干扰组细胞棕榈油酸相对含量极显著高于对照组，而硬脂酸相对含量极显著低于对照组(P<0.01)；总饱和脂肪酸相对含量显著低于对照组，而总单不饱和脂肪酸相对含量显著高于对照组(P<0.05)。过表达组细胞棕榈油酸相对含量显著高于对照组(P<0.05)，油酸和亚油酸相对含量极显著高于对照组(P<0.01)，而硬脂酸和花生四烯酸相对含量极显著低于对照组(P<0.01)：总饱和脂肪酸相对含量极显著低于对照组(P<0.01)，总单不饱和脂肪酸相对含量极显著高于对照组(P<0.01)，总多不饱和脂肪酸相对含量显著低于对照组(P<0.05)。 3.DGAT2表达调控对脂肪酸相关基因的表达有显著影响，干扰组细胞PPARγ、FAT/CD36、SCD1、FASN、ATGL和HSL mRNA表达水平显著低于对照组(P<0.05)，并且FAT/CD36、SCD1、FASN及ATGL蛋白表达水平也显著低于对照组(P<0.05)，而且α-FABP mRNA及蛋白表达水平极显著低于对照组(P<0.01)；而过表达组细胞PPARγ、FAT/CD36、SCD1、ACC2、FASN和ATGL mRNA表达水平显著高于对照组(P<0.05)，并且ATGL、SCD1及FASN蛋白表达水平也显著高于对照组(P<0.05)，而且α-FABP mRNA及蛋白表达水平极显著高于对照组(P<0.01)。 4.利用GC-IRMS方法检测各脂肪酸中13C的δ值，干扰组细胞13C16:0(棕榈酸)中13C的δ值显著高于对照组(p<0.05)，过表达组细胞13C16:1(棕榈没酸)中13C的δ值极显著高于对照组(P<0.01)，13C18:1(油酸)中13C的δ值也高于对照组(P=0.087)。 上述结果表明：DGAT2的表达调控显著影响3T3-L1细胞的甘油三酯含量及脂肪酸组成，并且由于在稳定性同位素试验中，细胞培养液中不含有13C16:1(棕榈油酸)，但却检测出过表达组细胞中13C16:1(棕榈油酸)的13Cδ值极显著高于对照组，而干扰组细胞13C16:0(棕榈酸)中的13Cδ值显著高于对照组，因此DGAT2对单不饱和脂肪酸选择沉积可能是通过间接途径作用的。