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目的通过制备CCI神经痛大鼠模型,从脊髓背角5-HT及其受体的调控途径,探讨腕踝针治疗神经痛的作用机制,以期为腕踝针的临床应用及其研究提供基础依据。方法实验一:将SD大鼠随机分为对照组、模型组、腕踝针组,每组10只。模型组、腕踝针组通过在右侧坐骨神经主干松扎4道,制备慢性限制性损伤(the chronic constriction injury,CCI)神经痛模型。对照组只暴露坐骨神经,但不结扎。术后第7~14天腕踝针组大鼠选取右侧“下4”、“下5”、“下6”穴行腕踝针治疗,每次连续留针4h,连续7天。对照组、模型组同等条件抓取、固定但不干预。术前及术后第7天(干预前)、第14天(干预后),用Von-Frey纤维毛及PL-600辐射热测痛仪分别检测机械痛阈值和热痛阈值;采用酶联免疫吸附测定法检测脊髓背角5-HT、5-HT1A受体、5-HT2A受体、5-HT3受体的含量;采用免疫荧光组织化学检测中缝背核TPH-2、小胶质细胞活化标志物(Iba-1)、星形胶质细胞表达标记物(GFAP)的表达,以及脊髓背角5-HT1A受体、5-HT2A受体、5-HT3受体的表达情况。实验二:将SD大鼠随机分为对照组、模型组、腕踝针组、腕踝针+5-HT1A受体拮抗剂组(简称腕踝针+5-HT1A组)、腕踝针+5-HT2A受体拮抗剂组(简称腕踝针+5-HT2A组)、腕踝针+5-HT3受体拮抗剂组(简称腕踝针+5-HT3组),每组6只。模型组、腕踝针组、腕踝针+5-HT1A组、腕踝针+5-HT2A组、腕踝针+5-HT3组制备慢性限制性损伤CCI神经痛模型,操作方法与实验一相同。对照组只暴露坐骨神经,但不结扎。术后第7天,对照组、模型组同等条件抓取、固定但不干预,麻醉后脊髓鞘内注射生理盐水;腕踝针组干预方法同实验一,同时进行麻醉后脊髓鞘内注射生理盐水。腕踝针+5-HT1A组、腕踝针+5-HT2A组、腕踝针+5-HT3组在大鼠脊椎L4-L6节段鞘内注射5-HT受体拮抗剂(5-HT1A受体拮抗剂WAY-100635、5-HT2A受体拮抗剂Ketanserin、5-HT3受体拮抗剂Ondansetron)每次注射10ul,共注射3次。术后第7天(干预前)、第14天(干预后),用Von-Frey纤维毛及PL-600辐射热测痛仪分别检测机械痛阈值和热痛阈值,采用实时荧光定量PCR法检测脊髓背角IL-6、IL-1β、TNF-α的含量。结果实验一:腕踝针对CCI神经痛大鼠痛行为学、脊髓背角5-HT及其受体(5-HT1A、5-HT2A、5-HT3)的影响(1)腕踝针对CCI神经痛大鼠机械痛、热痛缩足阈值的影响:术前三组大鼠机械痛、热痛基线齐,无统计学差异(P均>0.05)。术后第7天,模型组、腕踝针组与对照组比较,机械痛、热痛阈值明显下降(P均<0.01)。术后第14天,模型组大鼠与对照组比较,机械痛、热痛阈值明显下降(P均<0.01)。腕踝针组与模型组比较,腕踝针组的机械痛、热痛阈值显著上升(P均<0.05)。(2)色氨酸羟化酶-2表达情况:与对照组比较,模型组大鼠中缝背核TPH-2表达显著上升(P<0.05);与模型组比较,腕踝针组大鼠中缝背核TPH-2表达显著下降(P<0.05)。(3)5-HT含量及其受体的表达情况:与对照组比较,模型组大鼠脊髓背角5-HT、5-HT1A受体、5-HT2A受体、5-HT3受体含量显著上升(P均<0.05);与模型组比较,腕踝针组大鼠脊髓背角5-HT、5-HT2A受体、5-HT3受体含量显著下降(P均<0.01),5-HT1A受体含量显著上升(P<0.001)。实验二:腕踝针结合鞘内注射5-HT受体拮抗剂对CCI神经痛大鼠脊髓背角胶质细胞及炎症因子的影响(1)腕踝针+5-HT受体拮抗剂对CCI神经痛大鼠机械痛、热痛阈值的影响:模型组与对照组比较,机械痛、热痛阈值明显下降(P均<0.01)。腕踝针组与模型组相比,腕踝针组的机械痛、热痛阈值显著上升(P均<0.01)。腕踝针+5-HT1A组、腕踝针+5-HT3组与腕踝针组比较,机械痛阈值、热痛显著下降(P均<0.01);腕踝针+5-HT2A组与腕踝针组比较,机械痛、热痛阈值无显著差异(P均>0.05)。(2)小胶质细胞活化标记物(Iba-1)、星形胶质细胞激活标志物(GFAP)的表达情况:与对照组比较,模型组大鼠脊髓背角Iba-1、GFAP免疫反应平均荧光强度明显增强(P均<0.01);与模型组比较,腕踝针组大鼠脊髓背角Iba-1、GFAP免疫反应平均荧光强度显著降低(P均<0.01)。(3)炎症因子IL-6、IL-1β、TNF-αmRNA含量变化情况:与对照组比较,模型组大鼠脊髓背角IL-6、IL-1β、TNF-αmRNA含量显著上升(P均<0.05);与模型组比较,腕踝针组脊髓背角IL-6、IL-1β、TNF-αmRNA含量显著下降(P均<0.01);与腕踝针组比较,腕踝针+5-HT1A组、腕踝针+5-HT3组脊髓背角IL-1β、TNF-αmRNA含量显著上升(P均<0.01),腕踝针+5-HT2A组变化无显著差异(P>0.05);腕踝针+5-HT1A组、腕踝针+5-HT2A组、腕踝针+5-HT3组脊髓背角IL-6 mRNA含量无显著差异(P均>0.05)。结论腕踝针可能通过抑制中缝背核TPH-2的兴奋性,降低脊髓背角5-HT含量、通过不同类型的5-HT受体,发挥抗炎镇痛作用。