复方青珠瘢痕膏研制及其抗瘢痕增生机制中IFN-γ、IL-1β表达调控的研究

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目的和意义:研究复方青珠瘢痕膏抑制瘢痕增生的作用及其抗瘢痕增生机制中IFN-γ、IL-1β的表达。方法:收集人皮肤增生性瘢痕,进行原代培养,所得细胞行HE染色及免疫细胞化学抗波形蛋白染色鉴定细胞为本实验所需成纤维细胞。实验分组为空白对照组、1‰碳酸氢钠溶液组、青蒿琥酯(240u g/ml)组、珍珠水解液(以钙离子含量为计,10mg/ml)组、青蒿琥酯(120μ g/ml)+珍珠水解液(5mg/ml)组、青蒿琥酯(240u g/ml)+珍珠水解液(5mg/ml)组、青蒿琥酯(240μ g/ml)+珍珠水解液(10mg/ml)组共七组。将各组溶液分别作用于第3-5代成纤维细胞24h后,以MTT法和流式细胞术检测细胞凋亡,FQ-RT-PCR法和Western-Blot法检测细胞因子IFN-γ,IL-1β的表达。对同法处理的成纤维细胞设立空白对照组及青蒿琥酯(240μ g/ml)+珍珠水解液(10mg/ml)组,行透射电镜检测,观察药物作用后的成纤维细胞超微结构变化。以24只新西兰大白兔建立兔耳瘢痕模型,分为6组,每组4只,分别为①空白对照组,②基质对照组,③硅酮凝胶组,④0.48%青蒿琥酯+0.3%珍珠水解液(以液体重量占膏体重量百分比为计,本组以下简称为“低浓度组”),⑤0.96%青蒿琥酯+0.3%珍珠水解液(简称为“中浓度组”),⑥1.92%青蒿琥酯+0.3%珍珠水解液(简称为“高浓度组”),于兔耳腹面长轴两侧做直径1cm的圆形创面,每只耳6个创面,待其自然愈合,术后28天开始用药,2次/天,术后56天处死动物,收集瘢痕标本,免疫组织化学法和Western-Bl0t法检测各组兔耳瘢痕组织中IFN-γ和IL-1β蛋白的表达。结果:1、经抗波形蛋白染色阳性、上皮角蛋白染色阴性证实,所得细胞为人皮肤瘢痕成纤维细胞。2、各浓度青蒿琥酯联合珍珠水解液作用于成纤维细胞后,经MTT法及流式细胞术检测,抑制细胞增殖、引起细胞凋亡,FQ-RT-PCR法和Western-Blot法检测,IFN-γ, IL-1β mRNA及蛋白表达均上调,与空白对照组比较,有统计学差异(P<0.05);各浓度组间行两两比较,P<0.05,差异有统计学意义。3、透射电镜下观察对照组及青蒿琥酯(240u g/ml)+珍珠水解液(10mg/ml)组成纤维细胞超微结构变化,可见用药组细胞线粒体数量明显减少,并出现肿胀和空泡化,核周隙增大,溶酶体及髓鞘样结构增多。4、各浓度组复方青珠瘢痕膏作用于兔耳瘢痕模型后,IFN-γ和IL-1β蛋白表达量均有升高,与空白对照组相比,差异具有显著统计学意义(P<0.01)。此外,复方青珠中浓度组与复方青珠低浓度组相比较,IFN-γ和IL-1β蛋白表达差异具有显著统计学意义(P<0.01)。结论:1、青蒿琥酯联合珍珠水解液能抑制人皮肤瘢痕成纤维细胞增殖,并在一定浓度范围内具有浓度依赖性。2、青蒿琥酯联合珍珠水解液共同作用于人皮肤瘢痕成纤维细胞后,可导致IFN-γ和IL-1β表达增强,可能是复方青珠瘢痕膏有效抑制皮肤瘢痕增生的机制之一。3、复方青珠瘢痕膏作用于兔耳瘢痕后,能上调瘢痕组织中IFN-γ和IL-1β的蛋白表达,且在一定浓度范围内,具有浓度依赖性。
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