本实验以阿魏酸为原料，设计合成了阿魏酸酯化物即阿魏酸乙酯，研究了影响酯化反应的条件，并比较了修饰前后的药理活性。 第一部分．阿魏酸乙酯的合成 目的：酯化修饰阿魏酸，合成阿魏酸乙酯。方法：以阿魏酸为原料，在酸催化下与无水乙醇进行酯化反应。生成五色阿魏酸乙酯结晶。结果：阿魏酸乙酯的熔点值41～42℃，与文献报道相符，产品质量好且收率高。结论：酸催化法合成阿魏酸乙酯的方案可行。 第二部分．阿魏酸乙酯药理活性研究 一．阿魏酸乙酯抗血小板聚集作用及其机制 目的：观察阿魏酸乙酯抗二磷酸腺苷（ADP）诱导的血小板聚集作用，及其对血小板细胞内钙波动的影响。方法：在含有阿魏酸乙酯和阿魏酸的兔富含血小板血浆（PRP）中加入ADP诱导血小板的集聚，用TYXN-91智能血液凝聚仪观察血小板聚集率，激光共聚焦显微镜观察血小板细胞聚集时细胞内钙离子的变化情况。结果：不同终浓度0.1、0.5、1.5、3.0mmol·L^-1的阿魏酸乙酯对ADP诱导的血小板聚集抑制百分数分别为26.3±3.3、33.4±2.4、73.4±3.1和94.9±2.7％，均显著高于等浓度的阿 第。军医大学硕士学位论文 魏酸水平＊一8，P＜o仍)。在阿魏酸乙酯作用下AD P诱导的血小板细 胞内钙离子荧光强度的变化（AF）为4．6土1．7，明显低于对照值 10．3士2石 ＊二8，P＜ow)。结论：阿魏酸乙酯抑制由AD P诱导的血 小板聚集作用比阿魏酸强。 二．阿魏酸乙酯对小鼠急性肝损伤的保护作用 目的：观察阿魏酸和阿魏酸乙酯对CCh所致小鼠急性肝损伤的保护作用。 方法：1．小鼠64只，随机分为8组，对照组、模型组、三个阿魏酸剂 量25。g·kg”‘、50lllg·kg”‘、100mg·kg”’给药组、三个阿魏酸乙酯剂量 25 mg·kg‘、50 mg·kg＊、100 mg·kg＊给药组，每天分DJ lp给药 5 d后， 除对照组外，其余各组分别用 CCb复制小鼠肝损伤模型，17 h后腹主动 脉取血，用比色法测小鼠血清中的ALT、AST；按Habig方法以CDNB为 底物测定血清中的SGST；实验方法按试剂盒说明书进行。2．以硫代巴 比妥酸比色法测定小鼠肝组织丙二醛（MDA）含量，用黄瞟吟氧化酶法 测定超氧化物歧化酶（SOD）活力，小鼠48只，随机分6组，对照组、 模型组、阿魏酸组 50 mg地“’、三个阿魏酸乙酯组50 mg·kg‘、100 mg·kg”’、 200 mg七g’‘，每天分别 lp阿魏酸和阿魏酸乙脂，给药 5 d后，除生理盐 水对照组外，其余各组分别用 CCb复制小鼠肝损伤模型，17 h后处死， 制备肝组织匀浆，取肝脏 100 p洗去残血，吸干水分，置于 0．9 rnL KCI 溶液中制成 10％肝匀浆液，测定 MDA值。将 10％肝匀浆液稀释成 1％ 组织匀浆测定SOD值。按试剂盒说明书的方法进行以上各项指标的测 定。并在电镜下观察阿魏酸乙酯对肝损伤小鼠线粒体的作用。结果：经 3 弟。罕医大学项士学位企文 阿魏酸乙酯灌胃的小鼠，肝组织 MDA、血清 ALT、AST、SGST含量明 显低于对照组（P＜0刀5），而肝组织的SOD值显著高于对照组（P＜0．05）。 电镜组织学观察结果表明，阿魏酸乙酯可减轻CCb对小鼠肝细胞线粒体 的损伤。结论：阿魏酸乙酯对CCb引起的小鼠急性肝损伤有明显的保护 作用，其作用强于阿魏酸。 三．阿魏酸乙酯对过氧化氢损伤的人血管内皮细胞ECV．304的保护作 用 目的：观察阿魏酸乙酯对人血管内皮细胞株ECV－304的保护作用。方法： 实验分对照组、模型组、阿魏酸组、阿魏酸乙酯组。过氧化氢损伤血管 内皮细胞。用四氮哇盐还原法（MTh）法，观察阿魏酸乙酯对过氧化氢 损伤的人血管内皮细胞株 ECV习04的影响。结果：0．l删l·L”‘、 0刀imp＊l工－’乞 Inmol·L”’气 0．Inmol·L”‘阿魏酸乙酯对过氧化氢损伤的人 血管内皮细胞株ECV－304有显著的保护作用。结论：阿魏酸乙酯具有保 护血管内皮细胞，减轻过氧化氢损伤的作用。