EBV感染树鼩外周血单个核细胞体外模型的研究

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EB病毒(Epstein-Barr virus,EBV)目前已知与多种恶性肿瘤如霍奇金病、鼻咽癌(nasopharyngealcarcinoma,NPC)以及Burkitt淋巴瘤密切相关,然而目前为止仍缺乏相关的典型且理想的实验动物模型,因此对于EBV的特性研究,尤其是EBV在肿瘤发生发展过程中的情况仍有待进一步探究,这些对于疾病的发生发展以及药物治疗的开发和应用等都有着重要的意义。目前已有研究表明EBV能够在体外感染正常人类B淋巴细胞并可以将他们转化为永生化的类淋巴母细胞系(Lymphoblastoid cell lines,LCLs),本研究基于EBV的这种特性,通过研究EBV体外感染树鼩、家兔、大鼠的外周血单个核细胞(Peripheral blood mononuclear cells,PBMCs)情况进行对比,旨在探究EBV感染树鼩体外模型的潜力,为进一步研究EBV感染特点、致病机制等奠定基础。目的:本研究通过EBV体外感染树鼩外周血单个核细胞,研究其感染情况及特点,探究体外研究方面树鼩作为EBV感染模型的可行性,为进一步研究EBV感染特点、致病机制等奠定基础。方法:选取成年树鼩20只,通过清醒状态下股静脉取血2.5ml;使用外周血单个核细胞分离液分别分离树鼩外周血单个核细胞。调整细胞密度约1×10~6/ml培养,实验组加入EBV的病毒悬液,调节终浓度为1×10~9copies/ml;空白组加入等量RPMI1640培养液。加入EBV后,定期使用显微镜观察PBMCs的细胞形态等变化、完成细胞计数、实时荧光定量PCR技术检测细胞中EBV拷贝数的变化、RT-PCR检测EBV相关基因的表达、免疫荧光检测EBV相关蛋白表达情况,透射电子显微镜观察细胞中是否含有病毒颗粒。结果:EBV感染后,大部分树鼩PBMCs能够被EBV成功感染。EBV成功感染的树鼩PBMCs呈聚集成团、形态变大变圆等表现;EBV感染后的树鼩PBMCs细胞数目增多,细胞重新开始增殖,增长率在2小时达到最高值;感染后细胞中EBV病毒载量拷贝数上升,呈波动趋势,最后维持一定浓度;感染后的树鼩PBMCs能够检测到EBV相关基因及相关蛋白的表达。透射电子显微镜能够在感染后的细胞中观察到疱疹样病毒颗粒存在。结论:EB病毒体外能够感染树鼩外周血单个核细胞,感染后细胞具备成为EBV相关体外模型潜力;感染后的细胞体外生存时间延长,并具备LCLs部分特征。
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