目的:利用代谢组学方法和液-质联用技术,从代谢层面探讨京尼平苷对大鼠酒精性肝纤维化模型代谢轮廓和生物标记物的影响。为研制中药创新药物提供实验依据和技术支持,从而推动中药临床药学及中药创新药物研究的发展。方法:以酒精混合液结合高脂饲料的方法复制大鼠酒精性肝纤维化模型,选取不同时间点动态监测大鼠生理生化指标和组织病理切片。利用京尼平苷进行干预,比较模型组、干预组和空白组大鼠生理生化指标和组织病理切片的变化。利用代谢组学方法,采用UPLC-Q-TOF技术对各组大鼠不同时间点尿液进行检测分析,应用模式识别方法比较模型组和空白组尿液的代谢模式,找出酒精性肝纤维化模型的生物标记物并对其结构进行鉴定并分析,找出相关的代谢通路。分析模型组、干预组和空白组尿液的代谢模式,以整体的代谢网络及其生物标记物和相关代谢通路的变化来评价京尼平苷对酒精性肝纤维化的干预作用。结果:1.大鼠酒精性肝纤维化模型的复制采用白酒-玉米油-吡唑混合灌胃结合高脂饲料法复制模型,对大鼠4w、7w、11w及12w生理生化指标和组织病理切片进行检测分析,发现模型组大鼠AST、ALT、Hyp、HA、LN、CIV、PⅢNP含量明显升高,显示肝功能发生异常,胶原纤维含量升高,发生肝纤维化病变。γ-GT、ALP、TB、ALB、MDA、TG、CHOL 含量增加,SOD、GSH含量降低,显示胆功能降低,发生脂质过氧化损伤。以上各项指标4w出现显著性差异(P<0.05),7w后有极显著性差异(P<0.01),能较好的评价酒精性肝纤维化模型。HE、Masson染色相互对照,发现模型组大鼠4w起有轻度脂肪肝病理现象出现,7w起可见纤维组织增生,12w纤维化程度明显加深,肝小叶结构紊乱但结构仍存在,未进入肝硬化阶段;观察纤维增生的区域,可见纤维增生始于汇管区,随后再向中央静脉及外部延仲。结合二者的结果,表明本实验成功复制了大鼠酒精性肝纤维化模型,随着造模时间延长,肝纤维化程度逐渐加深。2.京尼平苷对大鼠酒精性肝纤维化的作用在复制模型的同时,给予京尼平苷对酒精性肝纤维化大鼠进行干预。分析各组大鼠12w生理生化指标和组织病理切片的差异。结果干预组大鼠AST、ALT、Hyp、HA、LN、CIV、PⅢNP、γ-GT、ALP、TB、TG、ALB 含量明显降低(P<0.05,P<0.01),SOD含量显著升高(P<0.05);HE、Masson染色显示,脂肪变性、肝细胞坏死明显减轻,胶原纤维含量明显减少。3.京尼平苷干预大鼠酒精性肝纤维化的代谢组学研究对UPLC-Q-TOF分析方法进行优化,建立适用于大鼠尿液代谢组学研究的分析方法,对模型组大鼠不同时间点的尿液进行代谢轮廓和模式识别分析,结果大鼠尿液代谢轮廓从7w开始出现明显差异,PCA分析显示不同时间点尿液样本明显分开,并且随着时间的推移,向着远离第Od尿液样品的方向变化,以第12w偏离程度最大。对造成这种代谢轨迹变化的潜在生物标记物进行表征,结合数据库检索鉴定出37个标记物,并找出这些标记物影响的相关代谢通路。对京尼平苷干预组、模型组和空白组数据比较,结果显示干预组尿液代谢轮廓向正常回调,有14个生物标记物具有明显的回调趋势。这些具有显著差异的生物标记物作为京尼平苷干预酒精性肝纤维化的药效生物标记物。结论:本实验成功复制了酒精性肝纤维化模型并优选出评价指标。京尼平苷能显著降低酒精性肝纤维化的各项生化指标,保护肝细胞受损,减轻脂肪变性和炎细胞浸润,抑制纤维组织增生。并利用代谢组学的方法找出37个酒精性肝纤维化模型的生物标记物,影响相关的代谢通路包括苯丙氨酸代谢、牛磺酸代谢、糖代谢以及一些其他的氨基酸代谢。通过对干预组、模型组和空白组的代谢数据进行比较,结果显示干预组大鼠代谢轮廓向正常回调,代谢轨迹与模型组明显分开并向空白组接近,显著回调酒精性肝纤维化模型生物标记物水平。证明京尼平苷对大鼠酒精性肝纤维化有较好的防治作用。