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脂肪酶(Lipase,EC3.1.1.3,甘油酯水解酶)是分解脂肪的酶。在动植物体和微生物中普遍存在,它是一类特殊的酯键水解酶,催化如下反应:甘油三酯+水=甘油+游离脂肪酸。脂肪酶被广泛应用于酯合成、手性化合物的拆分、化工合成中间体的选择性基因保护、高聚物的合成、肽合成等方面,应用前景十分广阔。本文比较了不同菌株脂肪酶拆分α-苯乙醇的能力,并对解脂假丝酵母脂肪酶的拆分条件、菌株产酶条件、酶的初步纯化和性质进行了研究。主要实验结果如下:1、可拆分α-苯乙醇菌株的筛选从土样和水样中筛选得到47株产脂肪酶的菌株,加上实验室保存的3株产脂肪酶菌株,构建了产脂肪酶菌库。对菌库中的菌株进行脂肪酶酶活的初筛,筛选出16株酶活相对较高的菌株进行拆分α-苯乙醇的复筛。确定高酶活、拆分能力较好的解脂假丝酵母(Candida lipolytica)作为进一步研究的出发菌株。2、α-苯乙醇拆分条件的研究论文对解脂假丝酵母所产脂肪酶在苯乙醇的拆分中进行了研究。确定了拆分反应的最佳条件:以二氯甲烷作为有机溶剂,反应体系为4mL,底物浓度:苯乙醇为0.6mol/L,乙酸乙烯酯为1.2mol/L,反应温度为40℃,酶量为0.2g,摇床转速为220r/min,反应时间为72h。经过优化,底物的总转化率由优化前的36.1%提高到45.2%,底物R-转化率由61.9%提高到了85.4%,底物S-转化率由9.8%降低到了4.15%,底物的e.e.值由39.6%提高到了70.2%,产物的e.e.值由73.3%提高到了95.1%,E值由9.5提高到了83.9,拆分效果经过优化有了大幅度的改进。3、解脂假丝酵母菌株产酶发酵条件的优化通过逐因子实验、Plackett-Burman设计、响应面法三种优化方法的结合,对解脂假丝酵母的产酶条件进行优化。优化后的发酵条件为:葡萄糖0.25%,蛋白胨0.60%,K2HPO4 0.603%,KH2PO4 0.10%,MgSO4·7H2O 0.05%,橄榄油0.50%,吐温-80 0.50%,初始pH值为7.85,转速为180 r/min,28℃培养48h。酶活高达208.9U/mL,是初始酶活91.3 U/mL的2.29倍。4、解脂假丝酵母脂肪酶的酶学性质研究对酶液进行了酶学性质的研究。研究发现,该酶的最佳反应温度为40℃,最适pH为8.0。该酶在50℃以下,pH6—8的范围内稳定性比较好。Zn2+、Mg2+、K+等离子对酶活有促进作用,Cu2+、EDTA对酶活有抑制作用。并对酶粉的制备进行试验,经硫酸铵沉淀、聚乙二醇浓缩及冷冻干燥,酶粉的酶活高达3740U/g。