基于香豆素-半花菁骨架发展裸眼和线粒体靶向荧光探针检测生物硫醇和过氧化氢

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荧光检测法具备灵敏度高、可视性强、操作简单、选择性好、成本低、对细胞损伤小等优点,在生命科学及生物分析等领域成为不可或缺的检测手段。香豆素类化合物因其光稳定性好、荧光量子产率高和Stokes位移大等优点常被作为荧光团。本论文在香豆素结构的基础上,引入半花菁骨架构建香豆素-半花菁杂合体荧光团CHM-OH,并基于该荧光团设计合成了两个荧光探针,分别用于检测线粒体中的生物硫醇和过氧化氢(H2O2)。主要内容如下:(1)线粒体中的生物硫醇例如半胱氨酸(Cys)、同型半胱氨酸(Hcy)和谷胱甘肽(GSH)对维持线粒体的氧化还原稳态至关重要,在众多的生理和病理过程中扮演着重要的角色。因此,发展荧光探针检测线粒体中的生物硫醇具有重要的意义。我们以CHM-OH为荧光团、丙烯酸酯单元为识别基团和3H-吲哚正离子为线粒体靶向基团设计合成了荧光探针CHM1。该探针能够高选择性地检测生物硫醇。它在PBS(10 m M,pH=7.4)缓冲体系中对Cys的响应时间和检测限分别为5 min和0.27μM。此外,Cys诱导了测试体系明显的颜色变化:从浅黄到紫色,简便了裸眼观察。该探针也被成功应用于成像He La细胞线粒体中生物硫醇的产生。(2)基于线粒体中H2O2的生理和病理功能,发展荧光探针检测线粒体中H2O2引起了研究者足够的兴趣。我们以CHM-OH为荧光团、硼酸酯为分子开关和3H-吲哚正离子为线粒体靶向基团设计合成了荧光探针CHM2。该探针能够选择性地检测H2O2,在PBS(10 m M,pH=7.4)缓冲体系中对H2O2的响应时间和检测限分别为20 min和1.63μM。该探针对检测H2O2表现出众多优良的性质:如裸眼观察、红色荧光响应、良好的水溶性等。荧光共定位实验证实:它能有效地靶向He La细胞线粒体,检测外源性和内源性H2O2的产生。
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