EGM合成工艺优化、结构表征及其体外吸附霉菌毒素的能力和对淋巴细胞的保护作用

来源 :青岛农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:tc_b074220
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试验一酯化葡甘露聚糖合成工艺优化试验   为了获得吸附能力更好的酯化葡甘露聚糖(EGM),本试验选用4种方法对魔芋葡甘露聚糖(KGM)进行改性。研究了合成EGM所需的最优六偏磷酸钠、焦磷酸钠、正磷酸盐和氯磺酸与KGM的质量比、pH、反应温度、反应时间。由此得出,六偏磷酸钠法合成EGM的最优条件为:六偏磷酸钠与KGM质量比1∶6.5、pH值3.0、反应温度75℃、反应时间130min。焦磷酸钠法合成EGM的最优条件为:焦磷酸钠与KGM质量比1∶7、pH值3.0、反应温度75℃、反应时间120min。正磷酸盐法合成EGM的最优条件为:正磷酸盐与KGM质量比1∶5、pH值6.0、反应温度120℃、反应时间90min。氯磺酸法合成EGM的最优条件为:KGM质量与氯磺酸体积比4∶10、反应温度50℃、反应时间7h。   试验二EGM对4种霉菌毒素体外吸附能力的研究   为了检验利用不同方法合成的EGM吸附霉菌毒素的能力,向含有霉菌毒素(黄曲霉毒素B1(AFB1)、呕吐毒素(DON)、玉米赤霉烯酮(ZEN)或烟曲霉毒素B1(FB1)的溶液中加入霉可吸、KGM、EGM1号、EGM2号、EGM3号、EGM4号各0.1g充分混匀,在温度为37℃的控温摇床中反应,试验至8h,3000r/m离心10min,分别取上清液检测霉菌毒素的含量。结果表明,霉可吸对AFB1、DON、ZEN和FB1的吸附力分别为301.20μg/g、101.98μg/g、273.56μg/g和333.57μg/g;GM对AFB1、DON、ZEN和FB1的吸附力分别为241.72μg/g、102.51μg/g、369.24μg/g和313.23μg/g;EGM1号对AFB1、DON、ZEN和FB1的吸附力分别为400.30μg/g、182.64μg/g、398.19μg/g和356.45μg/g;EGM2号对AFB1、DON、ZEN和FB1的吸附力分别为367.50μg/g、170.35μg/g、345.66μg/g和319.66μg/g;EGM3号对AFB1、DON、ZEN和FB1的吸附力分别为146.44μg/g、158.07μg/g、159.15μg/g和316.41μg/g;EGM4号对AFB1、DON、ZEN和FB1的吸附力分别为150.32μg/g、162.19μg/g、273.39μg/g和316.90μg/g。整体来看,EGM1号吸附霉菌毒素的效果优于同类产品,有良好的应用前景。   试验三EGM结构表征   本试验利用红外光谱法、凝胶色谱法、高效液相色谱法和固体核磁共振法对六偏磷酸钠法合成的EGM进行表征。由此得出,EGM分子量为1.78×106,D-甘露糖∶D-葡萄糖为1.91∶1,在EGM的C6、C3、C2位都发生了酯化反应,结合上了PO3-和(PO3-)6,结合程度C6>C3>C2。   试验四EGM吸附毒素对体外培养的鸡外周血淋巴细胞保护效应   将浓度为5.0×106个/mL的鸡外周血淋巴细胞分8组,每组4个重复。第1组为空白对照;第2组为阳性对照,添加霉菌毒素(10μg/mLAFB1、2.5μg/mLDON、5μg/mLZEN或5μg/mLFB1);第3~5组分别加入0.05%、0.10%和0.15%的EGM;第6~8组在加入霉菌毒素(10μg/mLAFB1、2.5μg/mLDON、5μg/mLZEN或5μg/mLFB1)基础上分别加入0.05%、0.10%和0.15%的EGM。在37℃、5%CO2培养箱中培养72h。检测淋巴细胞转化率和细胞培养液中IL-2、IFN-α和MDA含量以及SOD活性。结果表明,培养基中添加0.05%、0.10%和0.15%EGM对外周血淋巴细胞转化率、IL-2含量、IFN-α含量和MDA含量以及SOD活性、无显著影响(P>0.05)或能显著提高IL-2含量和IFN-α含量(P<0.05);10μg/mLAFB1、2.5μg/mLDON、5μg/mLZEN和5μg/mLFB1均能显著降低外周血淋巴细胞转化率,使IL-2和IFN-α含量减少,MDA含量增加,SOD活性降低(P<0.05);而染毒培养液中加入0.05%、0.10%和0.15%EGM后能显著改善霉菌毒素引起的外周血淋巴细胞转化率减少,IL-2和IFN-α含量减少,SOD活性降低,及MDA含量增加的现象(P<0.05)。由此可以得出,霉菌毒素可通过过氧化作用损伤淋巴细胞,EGM可有效的吸附霉菌毒素,对鸡外周血淋巴细胞产生保护效应。
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