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目的：构建包含变异链球菌(Streptococcus mutans,S.mutans)和表兄链球菌(Streptococcus sobrinus,S.sobrinus)两种致龋菌的抗原片段的防龋DNA复合疫苗pGJGAC/VAX,检测其在真核细胞中的表达,并通过不同途径免疫balb/c小鼠,评价小鼠体内的特异性抗体水平。
方法：利用半巢式PCR从表兄链球菌OMZ176中获得OMZ176 GTF-I与变异链球菌GTF区CAT区的同源序列,克隆入经双酶切的靶向防龋DNA疫苗pGJA-P/VAX中,构建包含CTLA4-Ig,PAc蛋白A区,GLU基因序列以及CAT基因序列的防龋DNA复合疫苗pGJGAC/VAX,并转染CHO细胞系,用细胞免疫组织化学实验以及蛋白质免疫印迹法检测其表达。重组质粒pGJGAC/VAX、对照质粒pGJGA/VAX(即不含CAT基因序列余同pGJGAC/VAX的质粒)及载体质粒pVAX1分别经股四头肌注射和鼻腔滴注免疫balb/c小鼠,ELISA法检测血清和唾液中的特异性抗PAc,抗GLU和抗CAT抗体水平。
结果：重组质粒的基因序列与预期完全相符。细胞免疫组织化学以及蛋白质免疫印迹结果显示,pGJGAC/VAX表达的抗原可以与特异性抗PAc,抗GLU和抗CAT抗体发生免疫反应。免疫小鼠的实验结果显示pGJGAC/VAX免疫组血清抗PAc IgG和抗GLU IgG水平及唾液抗PAc IgA和抗GLU IgA水平均与不含CAT区基因序列的对照质粒pGJGA/VAX引起的抗体水平无显著差异(P>0.05),但均显著高于空载体pVAX1免疫组(P<0.01)。pGJGAC/VAX免疫组血清抗CAT IgG水平显著高于对照质粒pGJGA/VAX及pVAX1免疫组(均P<0.01)。
结论：本实验成功构建了同时包含变异链球菌和表兄链球菌两种致龋菌的主要抗原的防龋DNA复合疫苗pGJGAC/VAX,可在真核细胞中正确表达,动物实验证实pGJGAC/VAX有效地诱导粘膜和系统体液免疫反应,能够产生抗变异链球菌和表兄链球菌两种致龋菌主要抗原的特异性抗体。