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目的:提取Sprague-Dawley大鼠来源的骨髓间充质干细胞(Bone Marrow MesenchymalStem Cells,BMSCs),进行细胞培养,保证充足及稳定的细胞来源。构建慢病毒载体,并在体外感染BMSCs。获得过表达CXCR4的BMSCs。体外实验探讨上调SDF-1/CXCR4轴对BMSCs迁移效率的影响。为体内实验提供合理有效的工具。方法:全骨髓贴壁法提取BMSCs后进行体外细胞培养,并分为过表达组(CXCR4-GFP-BMSCs)、空病毒组(GFP-BMSCs)及普通干细胞组(BMSCs);构建携带CXCR4目的基因及绿色荧光蛋白基因的慢病毒载体,利用PCR及测序方法确定载体携带目的基因CXCR4,并对慢病毒进行包装及滴度检测;慢病毒载体感染BMSCs,荧光显微镜下观察病毒感染效率,获得最佳感染复数。利用RT-PCR和Western blot检测上调的CXCR4表达水平;使用不同浓度的SDF-1(0、50、100、200)ng/ml 作用于正常 BMSCs,应用 Transwell 实验,观察 BMSCs细胞迁移效率。选用最佳SDF-1浓度趋化不同CXCR4表达的干细胞,观察不同CXCR4表达对干细胞迁移效率的影响。结果:①体外全骨髓提取培养的BMSCs形态成纺锤形。第3代后,细胞形成趋于均一,呈旋涡状生长;②体外成功构建慢病毒载体,通过PCR及基因测序,验证携带CXCR4目的基因。包装后检测病毒滴度为1×108Tu/ml;③过表达组慢病毒转染的最佳感染值MOI=30,感染效率达80%,Western Blot及RT-PCR均提示CXCR4高表达;④不同浓度的SDF-1(0、50、100)ng/ml作用于正常BMSCs,其迁移效率随SDF-1浓度升高而增高,而高浓度100ng/ml和200ng/ml时迁移效率无明显差异。⑤同一 SDF-1浓度下,过表达CXCR4的BMSCs迁移效率明显高于空病毒组及普通BMSCs组。结论:①利用全骨髓贴壁法分离培养及细胞传代后可获得高纯度的BMSCs;②慢病毒感染是有效可行的获得过表达CXCR4的BMSCs的基因工程方法;③体外上调SDF-1/CXCR4轴可明显促进BMSCs的迁移。